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1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文CBN對腦缺血再灌注小鼠的保護作用姓名:金文申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生藥學(xué)指導(dǎo)教師:杜力軍2002.7.1頌士學(xué)位論文中義摘要中文摘要目前研究表明,急慢性缺血性腦損傷使局部微循環(huán)血流下降,氧和葡萄糖供應(yīng)下降,線粒體功能受損,導(dǎo)致能量代謝障礙,再灌注還可以造成自由基產(chǎn)生增加,對細胞內(nèi)鈣緩沖能力下降,最終導(dǎo)致神經(jīng)細胞損傷、死亡。腦血管新藥金森腦泰粉針劑(Cerebralbloodnutrition,CBN)由葛根
2、黃酮(含量82%)和三七皂苷(含量94%)按6:4的比例組合而成,臨床用于治療缺血性腦梗塞。為了進一步研究CBN的腦保護作用的機理,為臨床應(yīng)用提供有力的理論根據(jù),本研究采用小鼠腦缺血再灌注模型,從體外實驗、體內(nèi)實驗觀察了形態(tài)學(xué)、SOD活性、MDA含量、ATPase活性、單胺類遞質(zhì)等方面CBN對腦的保護作用,為進一步探討其對線粒體的保護作用,提取了小鼠的腦線粒體,觀察其對線粒體的影響。本研究采用生化、組化、細胞生物、分子生物等技術(shù)方法,從
3、整體、細胞、細胞器、分子水平等方面觀察了CBN對缺血再灌注腦的保護作用。本研究結(jié)果顯示,小鼠腦缺血再灌注損傷后,海馬CAl區(qū)錐體細胞數(shù)目減少,腦組織SOD活性降低,MDA含量升高,CBN能增加海馬CAl區(qū)錐體細胞數(shù)目,并保護腦內(nèi)SOD活性,減少MDA的生成,提示CBN減少了氧自由基的產(chǎn)生,減輕脂質(zhì)過氧化損傷,并且增強了機體清除自由基的能力,從而減輕自由基誘導(dǎo)的損害。腦缺皿再灌注后,能量代謝障礙、興奮性氨基酸大量釋放以及大量氧自由基的產(chǎn)生
4、均可使ATPase活性降低,從而導(dǎo)致一系列的病理生理過程改變。本研究表明,CBN可以減輕腦缺血再灌注后腦內(nèi)ATPase活性的降低,且呈劑量依賴性,減輕了腦缺血再灌注損傷。體外腦神經(jīng)細胞培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示,CBN可以直接作用于腦神經(jīng)元,并對其起保護作用。神經(jīng)細胞缺糖缺氧后,LDH逸漏率明顯增高,MDA含量顯著升高,SOD活性下降,表明細胞膜損傷加重,細胞清除自由基的能力下降。CBN(104,104)均能顯著改善這些異常變化,并表現(xiàn)出明顯的劑
5、量依賴關(guān)系,其中在升高SOD活性方面,CBN(10“)藥效優(yōu)于三七皂苷(10。4)。由此提示,CBN對于腦血栓梗塞所引起的缺氧狀態(tài)的腦神經(jīng)元及其功能具有較好的保護作用。小鼠腦缺血再灌注損傷后,腦線粒體膜腫脹,表現(xiàn)為線粒體的OD520。。值降低,CBN(50,100mg/kg,iv)的OD520。。值顯著增加,即對腦線粒體膜腫脹有明顯的抑制作用,表明CBN對腦線粒體膜有一定的保護作用。根據(jù)線粒體的拉曼光譜和傅立葉轉(zhuǎn)換近紅外光譜掃描的結(jié)果,
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