大黃酚對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：大黃酚(Chrysophanol，Chry)，化學(xué)名為1，8-二羥基-3甲基葸醌(1,8-dihydroxy-3methyl anthraquinone)，屬于羥基葸醌類，為大黃的有效成分之一。國內(nèi)外文獻有關(guān)大黃的報道很多，作用非常廣泛。早期藥理研究表明，大黃有抗高脂血癥、降低血壓、抗菌、抗腫瘤、瀉下等作用，現(xiàn)代藥理實驗研究證實大黃還具有抑制血栓形成、預(yù)防冠心病的發(fā)生、保護肺功能、保護胃腸粘膜、消炎利膽、改善肝腎功能等作用。特別是

2、近年來實驗研究表明，大黃具有抗衰老作用，能清除氧自由基、抑制膽堿酯酶、增強血及腦組織中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)活性，并能改善學(xué)>-j記憶障礙。而作為大黃的有效成分之一的大黃酚，其藥理作用的文獻報道卻很少，僅限于傳統(tǒng)的抗菌、瀉下、止血等方面。我室前期工作已證實大黃酚能明顯減少大鼠肝、腦過氧化脂質(zhì)生成，對學(xué)習(xí)記憶有一定

3、的影響，具有抗衰老作用，能改善學(xué)習(xí)記憶障礙。老年性癡呆癥可分為原發(fā)性癡呆癥和血管性癡呆癥，多灶性梗死是導(dǎo)致血管性癡呆的重要病因，嚴(yán)重影響中老年人的生活質(zhì)量。目前大黃酚對腦缺血再灌注實驗動物記憶功能的影響研究未見報道。本課題采用小鼠短暫性腦缺血模型，研究大黃酚對腦缺血再灌注損傷后小鼠記憶功能的保護作用，并進行機制的分析，為其應(yīng)用于臨床治療疾病提供有力的理論和實驗依據(jù)。 方法：采用Himori法暫時性阻斷兩側(cè)頸總動脈制備小鼠腦缺血

4、再灌注損傷的模型進行以下實驗研究：避暗法實驗；穿梭實驗；探索運動實驗；抗氧化酶活性的測定和耐缺氧實驗。 實驗分組：(1)在避暗法實驗和探索運動實驗中，手術(shù)后48i1將小鼠放入箱內(nèi)進行預(yù)選，在箱內(nèi)自由活動3min，3min內(nèi)不進入暗室者剔除。將經(jīng)過預(yù)選的小鼠隨機分為5組，分別為假手術(shù)組(進行手術(shù)，但不進行腦缺血再灌注)、對照組(即腦缺血再灌注組)、大黃酚高劑量組、中劑量組和低劑量組，高、中、低劑量組于缺血前30min分別ip大黃酚

5、10，1，0.1mg.kg<'-1>；假手術(shù)組與對照組于缺血前30min分別ip溶劑10mg．kg<'-1>。(2)在穿梭實驗、抗氧化酶活性的測定和耐缺氧實驗中，手術(shù)后48小時將小鼠隨機分為5組，分組同上。 結(jié)果： 1 行為學(xué)實驗 1.1避暗法實驗：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠表現(xiàn)出明顯的由腦缺血再灌注損傷所引起的記憶功能障礙，使小鼠進入暗室的潛伏期明顯縮短(P<0.01)，錯誤次數(shù)明顯增多(P<0.01)。腦缺血

6、前給予大黃酚10，1，0.1mg．kg<'-1>，則對腦缺血再灌注小鼠所致記憶功能障礙有明顯保護作用，潛伏期明顯延長(P<0.01)，錯誤次數(shù)減少(P<0.05)。 1．2穿梭實驗：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠表現(xiàn)出明顯的由腦缺血再灌注損傷所引起的記憶功能障礙，小鼠被電擊次數(shù)明顯增加(P<0.01)，電擊時間明顯延長(P<0.01)，主動逃避時間明顯延長(P<0.01)。腦缺血前給予大黃酚，則對腦缺血再灌注小鼠所致記憶功能障礙有明

7、顯保護作用，小鼠被電擊次數(shù)減少(Chry10 mg．kg<'-1> P<0.01，Chry 1mg．kg<'-1>P<0.05)，電擊時間明顯縮短(Chry10，1mg.kg<'-1>P<0.01)，主動逃避時間縮短(Chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chrylmg.kg<'-1>P<0.05)。 1．3探索運動實驗 1．3．1小鼠到達暗室時間、到達高端時間、到達明室時間、爬高端的次數(shù)比較：和假手術(shù)組相比，

8、對照組小鼠到達暗室時間明顯延長(P<0.01)、到達高端時間明顯延長(P<0.01)、到達明室時間明顯延長(P<0.01)，小鼠爬高端的次數(shù)明顯減.少(P<0.01)，表現(xiàn)出小鼠明．顯的探索認(rèn)知行為功能障礙。給予大黃酚，則對腦缺血再灌注小鼠所致探索認(rèn)知行為功能障礙有明顯的改善作用，小鼠到達暗室時間明顯縮短(Chry10，lmg.kg<'-1>P<0.01)、到達高端時間明顯縮短(Chry10，lmg.kg<'-1>P<0.01)、到達明

9、室時間縮短(Chry10，lmg.kg<'-1>P<0.05)，爬高端的次數(shù)明顯增加(Chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chry1mg.kg<'-1>P<0.05)。 1．3．2小鼠在暗室滯留時間和在明室滯留時間的比較：根據(jù)實驗技術(shù)指標(biāo)的比較要求，只在同一組內(nèi)進行這兩項指標(biāo)比較，對照組和大黃酚0.1mg.kg<'-1>組的小鼠在暗室滯留時間和在明室滯留時間有明顯差異(P<0.001)，而假手術(shù)組，大黃酚高、中劑量組

10、在暗室滯留時間和在明室滯留時間無明顯差異(P>0.05)，說明大黃酚對腦缺血再灌注小鼠所致探索認(rèn)知行為功能障礙有明顯的改善作用。 2.腦內(nèi)抗氧化酶活性的測定 2．1 腦內(nèi)GSH-PX活力測定：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠腦內(nèi)GSH-PX活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠腦內(nèi) GSH-PX 活性明顯提高(Chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chry1，0.1mg.kg<'-1>P<0.05)。

11、 2．2 腦內(nèi)SOD活力測定：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠腦內(nèi)SOD活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠腦內(nèi)SOD活性明顯提高(chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chry 1，0.1mg.kg<'-1>P<0.05)。 2．3 全血中GSH-PX活力測定：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠全血中GSH-PX活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠全血中GSH-PX活性明顯提高(C

12、hry10mg.kg<'-1>P<0.01)。 2．4 血漿SOD活力測定：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠血漿SOD活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠血漿SOD活性明顯提高(Chry10，1mg.kg<'-1>P<0.01)。 3.耐缺氧實驗 3．1小鼠斷頭耐缺氧實驗：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠斷頭耐缺氧的喘息時間明顯縮短(P<0．01)，大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠斷頭耐缺氧的喘息時間明顯延長(

13、ChrylO，l mg．kg’P<0．0 1，Chry0．1 mg．kg。P<0．05)。說明腦缺血再灌注小鼠急性耐缺氧的能力減弱，大黃酚能提高小鼠急性耐缺氧能力。 3．2小鼠常壓耐缺氧實驗：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠常壓耐缺氧的生存時間明顯縮短(P<0．01)，大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠常壓耐缺氧的生存時間明顯延長(Chryl O，1mg．kg。P<0．01)。說明腦缺血再灌注小鼠常壓耐缺氧的能力減弱，大黃酚能提高小鼠常壓耐缺

14、氧能力。 3．3小鼠亞硝酸鈉中毒實驗：和假手術(shù)組比較，對照組小鼠由于亞硝酸鈉中毒所致缺氧的生存時間明顯縮短(P<0.01)，大黃酚組對腦缺血再灌注小鼠由于亞硝酸鈉中毒所致缺氧的生存時間明顯延長(Chry10mg.kg<'-1>：P<0.01，Chry1mg.kg<'-1>P<0.05))。說明腦缺血再灌注小鼠由于亞硝酸鈉中毒所致耐缺氧的能力減弱，大黃酚能提高小鼠耐缺氧能力。 結(jié)論： 大黃酚對腦缺血再灌注損傷具有