椎間盤(pán)炎動(dòng)物模型的建立及自免疫狀態(tài)的研究.pdf

1、目的：通過(guò)手術(shù)破壞纖維環(huán)和軟骨終板建立椎間盤(pán)炎的動(dòng)物模型，探討其影像學(xué)表現(xiàn)及自免疫狀態(tài)表達(dá)的變化過(guò)程，探討自免疫反應(yīng)在椎間盤(pán)炎中的作用機(jī)制，為臨床診斷和治療提供理論基礎(chǔ)。 方法：選擇健康成年新西蘭大耳白兔50只，雌雄不限，隨機(jī)分為三組：手術(shù)組(30只)，經(jīng)前外側(cè)入路手術(shù)破壞腰椎間盤(pán)纖維環(huán)及軟骨終板，建立兔椎間盤(pán)炎動(dòng)物模型；設(shè)立假手術(shù)組(10只)及對(duì)照組(10只)。對(duì)照組即刻行X線(xiàn)及MRI檢查，處死取腰3/4、腰4/5、腰5/6椎

2、間盤(pán)標(biāo)本。假手術(shù)組同手術(shù)組取相同手術(shù)入路，暴露椎間盤(pán)但不破壞纖維環(huán)和軟骨終板。手術(shù)組與假手術(shù)組分別于術(shù)后1周、2周、4周、8周、12周分批處死動(dòng)物，處死取材前行X線(xiàn)片、MRI檢查。取手術(shù)區(qū)椎間盤(pán)標(biāo)本，行：(1)常規(guī)HE染色，形態(tài)學(xué)比較及淋巴細(xì)胞的表達(dá)；(2)Masson染色，觀察肌組織炎癥纖維化表現(xiàn)；(3)應(yīng)用免疫組化技術(shù)和免疫熒光技術(shù)觀察標(biāo)本CD4陽(yáng)性、CD8陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞，免疫球蛋白IgG、IgM的表達(dá)。手術(shù)組與假手術(shù)組、對(duì)照組進(jìn)行

3、比較以分析各指標(biāo)的表達(dá)及變化過(guò)程，探討自免疫反應(yīng)在椎間盤(pán)炎中的作用；(4)細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)。 結(jié)果： 1.影像學(xué)表現(xiàn)：手術(shù)組常規(guī)X線(xiàn)檢查在術(shù)后1-2周未見(jiàn)異常征象，術(shù)后4周顯示手術(shù)區(qū)椎間隙狹窄，術(shù)后12周可見(jiàn)椎體骨質(zhì)破壞和硬化。術(shù)后4周MRI矢狀位T2WI上即可見(jiàn)手術(shù)椎間盤(pán)信號(hào)異常，呈不同程度的破壞、碎裂、變小，正常髓核的高信號(hào)消失，呈低信號(hào)改變。終板及終板下椎體松質(zhì)骨有不同程度的侵犯破壞致椎體和椎間盤(pán)分界模糊不清，相鄰椎體受

4、累，T2WI上呈混雜斑點(diǎn)狀高信號(hào)。術(shù)后12廚T2WI上可見(jiàn)手術(shù)椎間盤(pán)相鄰椎體高信號(hào)，發(fā)生病理性骨折。假手術(shù)組與對(duì)照組均未見(jiàn)異常。 2.HE染色：光鏡下可見(jiàn)手術(shù)組椎間盤(pán)內(nèi)、外層纖維環(huán)紊亂，失去正常結(jié)構(gòu)，膠原纖維不連續(xù)、增生，外層纖維環(huán)成纖維細(xì)胞增多，術(shù)后1-4周可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，近纖維環(huán)內(nèi)層髓核部分有大量軟骨細(xì)胞增生。假手術(shù)組及對(duì)照組則無(wú)上述表現(xiàn)。 3.Masson染色：光鏡下可見(jiàn)手術(shù)組椎間盤(pán)外層纖維環(huán)呈綠色，其邊緣肌組織

5、呈紅色，兩者交界的灰色區(qū)域?yàn)榧〗M織因炎癥反應(yīng)而正纖維化。其間散在淋巴細(xì)胞。 4.免疫組化染色：手術(shù)組1周、2周、4周的標(biāo)本可見(jiàn)近邊緣細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)有CD4陽(yáng)性、CD8陽(yáng)性淋巴細(xì)胞分布，其中CD4陽(yáng)性淋巴細(xì)胞主要在術(shù)后1周、2周取材的標(biāo)本表達(dá)較多，CD8陽(yáng)性淋巴細(xì)胞則在術(shù)后2周、4周取材的標(biāo)本表達(dá)較多。而假手術(shù)組則于術(shù)后1周、2周可見(jiàn)有極少量淋巴細(xì)胞表達(dá)，對(duì)照組未見(jiàn)淋巴細(xì)胞表達(dá)。手術(shù)組淋巴細(xì)胞表達(dá)與假手術(shù)組、對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、 5.免疫熒光：手術(shù)組可見(jiàn)手術(shù)椎間盤(pán)近邊緣區(qū)免疫球蛋白IgG、IgM呈陽(yáng)性反應(yīng)，于1周少量表達(dá)，術(shù)后2周、4周、8周大量表達(dá)。假手術(shù)組及對(duì)照組均可見(jiàn)IgG極少量表達(dá)，未見(jiàn)IgM表達(dá)。手術(shù)組與假手術(shù)組、對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6．細(xì)菌培養(yǎng)陰性。 結(jié)論： 1．運(yùn)用前外側(cè)入路手術(shù)破壞纖維環(huán)及軟骨終板可以建立椎間盤(pán)炎動(dòng)物模型，其影像學(xué)表現(xiàn)符合臨床文獻(xiàn)對(duì)椎間盤(pán)炎的報(bào)道； 2．纖維環(huán)及軟骨終板受破壞后，髓