運(yùn)動(dòng)病動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)體系的優(yōu)化.pdf

1、目的：運(yùn)動(dòng)?。╩otion sickness，MS），即暈車(chē)、暈船、暈機(jī)和航空運(yùn)動(dòng)病等，是由于前庭器官受刺激后引起的中樞及植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂的一種反應(yīng)。運(yùn)動(dòng)病是一種具有遺傳傾向并且發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的疾病。缺乏可靠的評(píng)價(jià)體系及令人滿意的運(yùn)動(dòng)病動(dòng)物模型是目前運(yùn)動(dòng)病機(jī)制研究及抗運(yùn)動(dòng)病新藥藥效學(xué)評(píng)價(jià)中面臨的亟待解決的問(wèn)題。Swiprosin-1是2004年由Vuadens等首次報(bào)到的一種27Kd的鈣相關(guān)蛋白，其功能目前尚不清楚。本研究的目的是優(yōu)化

2、自主創(chuàng)新制定的評(píng)價(jià)指標(biāo)，規(guī)范評(píng)價(jià)體系，培育出一株可遺傳的暈敏感及暈不敏感模型小鼠，并初步探討swiprosin-1在運(yùn)動(dòng)病發(fā)病中的可能作用。
　　 方法：進(jìn)一步優(yōu)化本教研室自主研發(fā)的暈反應(yīng)評(píng)價(jià)體系，利用該評(píng)價(jià)體系培育可遺傳的暈敏感及暈不敏感模型小鼠；利用半自動(dòng)生化儀和放射免疫分析技術(shù)測(cè)定大鼠暈刺激后血液生化指標(biāo)及血中激素水平的變化；免疫組化和免疫熒光雙染的方法觀察swiprosin.1的表達(dá)和分布；swiprosin-1慢病毒轉(zhuǎn)

3、染bEnd.3細(xì)胞觀察swiprosin-1對(duì)bEnd.3細(xì)胞通透性的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、一株可遺傳的自發(fā)性運(yùn)動(dòng)病小鼠及其對(duì)照株模型動(dòng)物的培育。
　　 利用以往建立的運(yùn)動(dòng)病評(píng)價(jià)指標(biāo)繼續(xù)選擇近親交配繁殖，逐代篩選，建立暈敏感及暈不敏感模型小鼠。在培育的過(guò)程中，用于繁殖的動(dòng)物都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格篩選，暈敏感的小鼠暈反應(yīng)指數(shù)大于8，暈不敏感小鼠的暈反應(yīng)指數(shù)小于2。暈敏感小鼠與暈不敏感小鼠的暈反應(yīng)指數(shù)已經(jīng)可以完全區(qū)分出

4、來(lái)。目前已經(jīng)培育到第13代。
　　 2、優(yōu)化評(píng)價(jià)指標(biāo)并規(guī)范實(shí)驗(yàn)條件和裝置，形成一套完善的暈反應(yīng)評(píng)價(jià)體系。
　　 觀察了小鼠8:00-12:00，12:00-16:00，16:00-20:00不同時(shí)間段對(duì)暈刺激的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)12:00-16:00及16:00-20:00暈反映指數(shù)均較8:00-12:00有顯著性增加，提示在運(yùn)用該評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)應(yīng)固定一個(gè)時(shí)間段。最佳的致暈條件為以48°/s2角加速度加速，速度達(dá)到360°/s后，立

5、即以48°/s2角加速度減速，直至旋轉(zhuǎn)停止，歷時(shí)15 s，如此反復(fù)刺激40 min。旋轉(zhuǎn)結(jié)束后，將動(dòng)物置于地面，立即觀察動(dòng)物5 min內(nèi)的反應(yīng)。
　　 通過(guò)灌胃給予小鼠染料，我們發(fā)現(xiàn)胃排空距離即染料前端至幽門(mén)的距離與暈反應(yīng)指數(shù)具有相關(guān)性。驗(yàn)證該評(píng)價(jià)體系的特異性，即給予動(dòng)物三種經(jīng)典的應(yīng)激刺激如寒冷、高溫及缺氧后發(fā)現(xiàn)，小鼠并無(wú)明顯的大、小便及立毛顫抖現(xiàn)象，從而證實(shí)了該評(píng)價(jià)指標(biāo)只對(duì)暈刺激敏感。
　　 3、暈刺激對(duì)大鼠血生化及血

6、中激素的影響。
　　 大鼠給予暈刺激后，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素、肌酐、總膽固醇、甘油三酯及胃泌素、胰島素與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異；血漿中胃動(dòng)素、內(nèi)皮素及促腎上腺皮質(zhì)激素與對(duì)照組相比也沒(méi)有顯著性變化。
　　 4、蛋白swiprosin-1在體內(nèi)的表達(dá)分布及功能。
　　 免疫組化結(jié)果顯示swiprosin-1主要分布在腦組織中微血管內(nèi)皮細(xì)胞上。細(xì)胞免疫熒光雙染法顯示，swiprosin-1主要分布在bEnd.3細(xì)胞的

7、胞漿中。Swiprosin-1病毒轉(zhuǎn)染bEnd.3細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)給予干擾病毒組細(xì)胞通透性升高，一氧化氮合成酶活性升高；給予過(guò)表達(dá)病毒組細(xì)胞通透性降低，一氧化氮合成酶活性降低。這些結(jié)果說(shuō)明swiprosin-1的低表達(dá)可以增加bEnd.3細(xì)胞通透性，有可能是通過(guò)影響一氧化氮合成酶來(lái)影響血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的。
　　 暈敏感小鼠較暈不敏感小鼠腦微循環(huán)血流量顯著增加。皮層注射swiprosin-1慢病毒后，發(fā)現(xiàn)抑制swiprosin-1表

8、達(dá)后，小鼠腦微循環(huán)血流量顯著增加，表明運(yùn)動(dòng)病的發(fā)生可能與腦微循環(huán)血流量有關(guān)，而swiprosin-1在暈反應(yīng)發(fā)生過(guò)程中可能起一定作用。
　　 結(jié)論：本教研室自主研發(fā)的暈反應(yīng)評(píng)價(jià)指標(biāo)是一項(xiàng)穩(wěn)定而靈敏的指標(biāo)，可用于抗運(yùn)動(dòng)病新藥的篩選和評(píng)價(jià)。蛋白swiprosin-1主要分布在腦組織中微血管內(nèi)皮細(xì)胞上。暈敏感較暈不敏感小鼠腦微循環(huán)血流量顯著增加，正常昆明種小鼠大腦皮層微血管抑制蛋白swiprosin-1表達(dá)后，腦微循環(huán)血流量顯著增加。