膠質(zhì)瘤中E2F-1、Rb的表達(dá)及其與腫瘤惡性程度的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 現(xiàn)有的研究已證實膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多基因共同作用、多步驟演變的結(jié)果，與許多癌基因的激活和抑癌基因的失活有關(guān)。近來發(fā)現(xiàn)抑癌基因Rb在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)存在明顯異常，還有一些研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子E2F-1不但參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，還與Rb相互作用，其過度的產(chǎn)生促進細(xì)胞增殖，導(dǎo)致腫瘤形成。目前，對于Rb與E2F-1在膠質(zhì)瘤中的關(guān)系的研究國內(nèi)尚無報道。本實驗擬研究Rb、E2F-1在不同級別人腦膠質(zhì)瘤表達(dá)的水平及其與腫瘤惡性程度的關(guān)系。

2、 方法： 1、標(biāo)本 取自中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科2006年7月～2007年3月手術(shù)切除的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本45例，其中男28例，女17例；年齡26～78歲。所有病例術(shù)前未行放、化療。標(biāo)本用10％中型甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，并作HE染色確定診斷，Ⅰ級12例，Ⅱ級15例，Ⅲ級10例，Ⅳ級8例。 2、主要試劑 E2F-1、Rb兔抗人單克隆抗體，SABC試劑盒以及DAB試劑盒均購自于武漢博

3、士德生物工程有限公司。 3、試驗方法結(jié)果判定應(yīng)用免疫組化SABC法檢測人腦膠質(zhì)瘤E2F-1和。Rb地表達(dá)情況。以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕褐色顆?；蚓蛔厣x為免疫組化陽性。對于每張切片計數(shù)陽性細(xì)胞的百分率，無陽性細(xì)胞計為(-)，陽性細(xì)胞少于10％為(+)，陽性細(xì)胞10％～50％為(++)，陽性細(xì)胞多于50％為(+++)。 4、統(tǒng)計方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗，P<0.05有統(tǒng)

4、計學(xué)意義。 結(jié)果： E2F-1陽性染色表現(xiàn)為細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕褐色物質(zhì)，在高分化組(Ⅰ～Ⅱ級)中呈散在的弱陽性表達(dá)，表達(dá)率為48.1％(13/27)；而在低分化組(Ⅲ～Ⅳ級)，表達(dá)明顯增強，表達(dá)率為83.3％(15/18)，與高分化組有顯著差異(P<0.05)。Rb陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，高分化組(Ⅰ～Ⅱ級)中20/27例(74.1％)與低分化組(Ⅲ～Ⅳ級)5/18例(27.8％)之間差異顯著，明顯高于低分化組(P

5、<0.05)。 討論： 膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相關(guān)。抑癌基因Rb是人體內(nèi)一種重要的抑癌基因，其過度的磷酸化和啟動子高度的甲基化是Rb基因喪失功能的主要原因。本研究顯示：膠質(zhì)瘤中有Rb蛋白的表達(dá)，低級別與高級別之間差異顯著(P<0.05)，高級別組缺失率更高，提示Rb基因突變或缺失在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，且與腫瘤惡性分化程度密切相關(guān)。E2F-1在調(diào)控細(xì)胞周期進展和

6、細(xì)胞增生中起著關(guān)鍵性的作用。膠質(zhì)瘤中E2F-1的高表達(dá)被認(rèn)為是膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的另一重要因素。本實驗提示：E2F-1的表達(dá)在高級別組明顯高于低級別組。另外，高級別組E2F-1表達(dá)率高，而Rb缺失率高，提示Rb可能抑制了E2F-1參與細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的某一環(huán)節(jié)。 結(jié)論： 本研究結(jié)果顯示，Rb與E2F-1表達(dá)與膠質(zhì)瘤級別有關(guān)聯(lián)，提示在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展以及侵襲過程中，兩種不同基因可能具有調(diào)控、誘導(dǎo)或信息傳遞的作用。檢測Rb與E2F-1的