分泌抗恩諾沙星單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立.pdf

1、恩諾沙星((Enrofloxacin，Enro)是一種動物專用藥物，屬于氟喹諾酮類(Fluoroquinolone，F(xiàn)Qs)藥物，為人工合成的新型廣譜殺菌抗菌藥物，廣泛用于水產(chǎn)及畜禽養(yǎng)殖，已經(jīng)成為我國目前常用的魚藥和獸藥之一。但恩諾沙星的大量不合理使用，使其成為殘留問題最為嚴(yán)重的獸藥。人類食用被污染的動物食品后，可導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)正常菌群產(chǎn)生耐藥性；引起人的中毒或者過敏反應(yīng)；影響體內(nèi)核酸的合成；以及引起癌變。美國、歐盟、日本等國家包括我國都對

2、恩諾沙星的使用做了嚴(yán)格的規(guī)定。美國現(xiàn)在已經(jīng)禁止使用恩諾沙星，歐盟規(guī)定在可食性動物組織中恩諾沙星的最高殘留限量(MRL)為30ug/kg。 本實驗首先以牛血清白蛋白(BSA)為載體蛋白，與Enro偶聯(lián)合成免疫抗原Enro-BSA；同樣的方法，以卵清白蛋白(OVA)為載體蛋白，使之與Enro偶聯(lián)合成檢測抗原Enro-OVA。并且進(jìn)行紫外光譜掃描，動物實驗及偶聯(lián)比計算等方面的鑒定。 然后以Enro-BSA為免疫抗原，免疫8周齡

3、Balb/c系小鼠，經(jīng)過四次免疫后，將小鼠斷尾采血，以Enro-OVA為檢測抗原，用間接ELISA法選出血清具有抗Enro的陽性鼠，取陽性小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞用50﹪PEG-1400進(jìn)行融合。通過檢測、克隆、篩選步驟，最終篩選出一株分泌抗Enro單克隆抗體的細(xì)胞株3D6。此細(xì)胞株有96條染色體，經(jīng)過20次傳代，仍具有分泌抗體的能力。取3D6細(xì)胞上清液進(jìn)行單抗亞類鑒定，結(jié)果表明，此株細(xì)胞所產(chǎn)單抗為IgG1亞型。將該株雜交瘤細(xì)胞注射