抗雞SIgA單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立.pdf

1、家禽黏膜免疫作為動物機體抵抗病原感染的第一道免疫屏障有著重要的意義。分泌型免疫球蛋白A(SIgA)做為黏膜免疫的效應因子，對病原菌在黏膜表面黏附、增殖，啟動免疫學生物活性，清除病原及保護機體抗感染等方面發(fā)揮重要作用。
　　 雜交瘤技術(shù)，是20世紀70年代到80年代誕生的生物高新技術(shù)，應用免疫學的抗體產(chǎn)生原理和細胞雜交技術(shù)，獲得單一抗原決定簇的高度均一的相應抗體，該種抗體特異性好，敏感性高，來源穩(wěn)定，容易標準化，與多克隆抗體相比，

2、具有顯著的特點。
　　 本研究首次以新鮮的雞膽汁為材料，采用硫酸銨鹽析法從雞膽汁中粗提純雞SIgA，應用SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳鑒定和純化SIgA重鏈，再用純化的雞SIgA重鏈蛋白與等體積的弗氏完全佐劑充分混合頸背部皮下多點注射8周齡雌性Balb/c小鼠，SIgA 50μg/只，隔2周后用弗氏不完全佐劑與之混合，共免疫2次，超強免疫純抗原以100μg/只尾靜脈和腹腔注射。3d后取小鼠脾細胞與NS0骨髓瘤細胞

3、，在聚乙二醇(PEG-1500)作用下進行細胞融合，當融合細胞長滿細胞培養(yǎng)板時，用間接ELISA進行陽性雜交瘤的篩選，通過有限稀釋法3次克隆后，篩選出1株能夠穩(wěn)定分泌抗雞SIgA單克隆抗體的雜交瘤細胞株5H9。經(jīng)間接ELISA檢測驗證，其細胞培養(yǎng)上清和腹水效價為1:400-1:800，1:16000，表明所獲得的單克隆抗體具有和SIgA高度親和力和特異性。6個月內(nèi)連續(xù)凍存和復蘇3次，并連續(xù)傳代10次后，抗雞SIgA雜交瘤細胞株仍能穩(wěn)定分