XBP1基因與中國(guó)漢族人白癜風(fēng)的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：白癜風(fēng)是一種皮膚科常見復(fù)雜疾病，人群中患病率約為0.1％-2％。盡管白癜風(fēng)的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明了，近年來(lái)的大量研究表明遺傳和免疫因素在白癜風(fēng)發(fā)病中起到重要作用。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道了6個(gè)白癜風(fēng)易感位點(diǎn)，相當(dāng)多的候選基因研究亦成為白癜風(fēng)遺傳學(xué)研究的熱點(diǎn)。在前期研究中，本課題組對(duì)143個(gè)白癜風(fēng)家系共736個(gè)體(包括369名患者和367名無(wú)白癜風(fēng)表型的正常對(duì)照)進(jìn)行全基因組掃描連鎖分析，證實(shí)了染色體22q12區(qū)域存在中國(guó)漢族人白癜風(fēng)的易感

2、位點(diǎn)。X盒結(jié)合蛋白(XBP1)基因位于該定位區(qū)域，是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子。X盒為HLA II類基因啟動(dòng)子區(qū)域的一個(gè)調(diào)控因子，與正向轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合后，增強(qiáng)下游基因的表達(dá)，而XBP1編碼的蛋白就是結(jié)合于X盒的這種轉(zhuǎn)錄因子，HLA-DR及DP的表達(dá)在很大程度上受XBP1基因的影響。結(jié)合白癜風(fēng)與HLA自身免疫的相關(guān)性，該基因可以看作是白癜風(fēng)的一個(gè)非常重要的功能候選基因。
　　 目的：通過(guò)一系列的遺傳和功能研究系統(tǒng)性探討位于染色體22q12區(qū)

3、域的XBP1基因與中國(guó)漢族人群白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性。
　　 方法：首先在319個(gè)中國(guó)漢族白癜風(fēng)患者(有家族史)及294個(gè)正常對(duì)照中，對(duì)XBP1基因的啟動(dòng)子區(qū)域、外顯子、外顯子和內(nèi)含子交界區(qū)域測(cè)序以及部分內(nèi)含子區(qū)域直接測(cè)序，進(jìn)行SNP篩查；然后分別對(duì)另外兩個(gè)獨(dú)立樣本(365病例/404對(duì)照和1402病例/1288對(duì)照,包括94個(gè)trios)進(jìn)行大規(guī)?；蚍中鸵则?yàn)證初期得到的位于啟動(dòng)子區(qū)域的一個(gè)SNP位點(diǎn)的關(guān)聯(lián)性；并采用序列特異性引物

4、-多聚酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)了HLA-DRB4*01，DRB1*04，DRB1*07，DRB1*12的基因頻率分布，應(yīng)用Logistic回歸進(jìn)行兩個(gè)位點(diǎn)的交互作用分析；構(gòu)建XBP1基因該SNP位點(diǎn)的重組質(zhì)粒的熒光素酶雙報(bào)告基因載體，轉(zhuǎn)染人HaCat和Mel-RM細(xì)胞，進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析，以檢測(cè)此多態(tài)對(duì)基因表達(dá)調(diào)控作用；分別采用實(shí)時(shí)定量PCR和免疫組化法從mRNA和蛋白水平分別檢測(cè)XBP1基因在白癜風(fēng)患者皮損和非皮損中是否存在表達(dá)差異。
　　

5、 結(jié)果：①在319個(gè)白癜風(fēng)患者和294個(gè)正常對(duì)照中對(duì)XBP1基因進(jìn)行測(cè)序，共檢出34個(gè)SNPs，其中位于啟動(dòng)子區(qū)域的SNP rs2269577等位基因頻率在白癜風(fēng)病例和對(duì)照間存在顯著性差異(p_trend=0.007，OR=1.36，95％CI=1.09–1.71)；②在另外的365個(gè)白癜風(fēng)患者和404個(gè)正常對(duì)照進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果仍提示該SNP位點(diǎn)有顯著意義(p_trend=0.008，OR=1.31，95％CI=1.07–1.59)；③

6、繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，在另外的獨(dú)立樣本(1402病例/1288對(duì)照,包括94個(gè)trios)的SNP關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)rs2269577位點(diǎn)的等位基因頻率在白癜風(fēng)患者和正常對(duì)照間存在顯著性差異(p=0.003,OR=1.18，95％CI=1.06–1.32; TDT檢驗(yàn)p=0.005，OR=1.93，95％CI=1.21–3.07)；合并分析全部2086例患者和1986例對(duì)照，所得結(jié)果顯示rs2269577等位基因頻率在病例和對(duì)照組間存在

7、極顯著相關(guān)(p_trend=2.94×10-6，OR=1.23，95％CI=1.13–1.35)；④在對(duì)1755個(gè)病例和1742個(gè)對(duì)照的HLA分型結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，HLA-DRB1*07與白癜風(fēng)存在顯著相關(guān)(p=4.53×10-21，OR=1.98，95％CI=1.72-2.29)，并與rs2269577存在交互作用(p=0.033)；⑤熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)結(jié)果顯示rs2269577 C等位基因可以增強(qiáng)XBP1啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，含有C等位基因

8、的質(zhì)粒所誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性明顯高于含有G等位基因所誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性(P<0.05)；⑥對(duì)白癜風(fēng)患者皮損和非皮損的XBP1 mRNA和蛋白水平的檢測(cè)均提示白癜風(fēng)皮損中XBP1的表達(dá)增高，且攜帶危險(xiǎn)等位基因C的白癜風(fēng)皮損表達(dá)比未攜帶等位基因C的皮損表達(dá)亦有增高趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：XBP1基因啟動(dòng)子區(qū)域的多態(tài)位點(diǎn)rs2269577與中國(guó)漢族人群白癜風(fēng)存在顯著相關(guān)性。其危險(xiǎn)等位基因C可能通過(guò)提高XBP基因的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)基因的表達(dá)從而參與白癜