XBP1基因與中國漢族人白癜風的相關性研究.pdf

1、背景：白癜風是一種皮膚科常見復雜疾病，人群中患病率約為0.1％-2％。盡管白癜風的病因和發(fā)病機制尚不明了，近年來的大量研究表明遺傳和免疫因素在白癜風發(fā)病中起到重要作用。目前已有文獻報道了6個白癜風易感位點，相當多的候選基因研究亦成為白癜風遺傳學研究的熱點。在前期研究中，本課題組對143個白癜風家系共736個體(包括369名患者和367名無白癜風表型的正常對照)進行全基因組掃描連鎖分析，證實了染色體22q12區(qū)域存在中國漢族人白癜風的易感

2、位點。X盒結合蛋白(XBP1)基因位于該定位區(qū)域，是一種重要的轉錄因子。X盒為HLA II類基因啟動子區(qū)域的一個調控因子，與正向轉錄因子結合后，增強下游基因的表達，而XBP1編碼的蛋白就是結合于X盒的這種轉錄因子，HLA-DR及DP的表達在很大程度上受XBP1基因的影響。結合白癜風與HLA自身免疫的相關性，該基因可以看作是白癜風的一個非常重要的功能候選基因。
　　 目的：通過一系列的遺傳和功能研究系統(tǒng)性探討位于染色體22q12區(qū)

3、域的XBP1基因與中國漢族人群白癜風發(fā)病的相關性。
　　 方法：首先在319個中國漢族白癜風患者(有家族史)及294個正常對照中，對XBP1基因的啟動子區(qū)域、外顯子、外顯子和內含子交界區(qū)域測序以及部分內含子區(qū)域直接測序，進行SNP篩查；然后分別對另外兩個獨立樣本(365病例/404對照和1402病例/1288對照,包括94個trios)進行大規(guī)?；蚍中鸵则炞C初期得到的位于啟動子區(qū)域的一個SNP位點的關聯(lián)性；并采用序列特異性引物

4、-多聚酶鏈反應法檢測了HLA-DRB4*01，DRB1*04，DRB1*07，DRB1*12的基因頻率分布，應用Logistic回歸進行兩個位點的交互作用分析；構建XBP1基因該SNP位點的重組質粒的熒光素酶雙報告基因載體，轉染人HaCat和Mel-RM細胞，進行瞬時表達分析，以檢測此多態(tài)對基因表達調控作用；分別采用實時定量PCR和免疫組化法從mRNA和蛋白水平分別檢測XBP1基因在白癜風患者皮損和非皮損中是否存在表達差異。
　　

5、 結果：①在319個白癜風患者和294個正常對照中對XBP1基因進行測序，共檢出34個SNPs，其中位于啟動子區(qū)域的SNP rs2269577等位基因頻率在白癜風病例和對照間存在顯著性差異(p_trend=0.007，OR=1.36，95％CI=1.09–1.71)；②在另外的365個白癜風患者和404個正常對照進行測序，結果仍提示該SNP位點有顯著意義(p_trend=0.008，OR=1.31，95％CI=1.07–1.59)；③

6、繼續(xù)擴大樣本量，在另外的獨立樣本(1402病例/1288對照,包括94個trios)的SNP關聯(lián)分析，結果進一步證實rs2269577位點的等位基因頻率在白癜風患者和正常對照間存在顯著性差異(p=0.003,OR=1.18，95％CI=1.06–1.32; TDT檢驗p=0.005，OR=1.93，95％CI=1.21–3.07)；合并分析全部2086例患者和1986例對照，所得結果顯示rs2269577等位基因頻率在病例和對照組間存在

7、極顯著相關(p_trend=2.94×10-6，OR=1.23，95％CI=1.13–1.35)；④在對1755個病例和1742個對照的HLA分型結果中發(fā)現(xiàn)，HLA-DRB1*07與白癜風存在顯著相關(p=4.53×10-21，OR=1.98，95％CI=1.72-2.29)，并與rs2269577存在交互作用(p=0.033)；⑤熒光素酶報告基因表達結果顯示rs2269577 C等位基因可以增強XBP1啟動子的轉錄活性，含有C等位基因

8、的質粒所誘導的轉錄活性明顯高于含有G等位基因所誘導的轉錄活性(P<0.05)；⑥對白癜風患者皮損和非皮損的XBP1 mRNA和蛋白水平的檢測均提示白癜風皮損中XBP1的表達增高，且攜帶危險等位基因C的白癜風皮損表達比未攜帶等位基因C的皮損表達亦有增高趨勢。
　　 結論：XBP1基因啟動子區(qū)域的多態(tài)位點rs2269577與中國漢族人群白癜風存在顯著相關性。其危險等位基因C可能通過提高XBP基因的轉錄活性，促進基因的表達從而參與白癜