?；蛆Z去氧膽酸對抗糖皮質(zhì)激素不良反應(yīng)的研究.pdf

1、糖皮質(zhì)激素具有多種藥理作用，在獸醫(yī)和人醫(yī)臨床上應(yīng)用十分廣泛。但是長期使用可導(dǎo)致多種不良反應(yīng)，如HPA軸抑制、加重感染、骨質(zhì)疏松及胃腸潰瘍等。但到目前為止尚無安全有效、較全面對抗糖皮質(zhì)激素不良反應(yīng)的藥物出現(xiàn)。因而本課題開展對抗糖皮質(zhì)激素類藥物不良反應(yīng)的研究具有重要意義。?；蛆Z去氧膽酸（TCDCA）是動(dòng)物膽汁的主要有效成分之一，是由?；撬幔═aurine，Tau）和鵝去氧膽酸（CDCA）相結(jié)合而成的酸性化合物，其化學(xué)名稱為3α,7α-二羥基

2、-5β-24-膽烷酰-N-牛磺酸。本課題開展了TCDCA對抗糖皮質(zhì)激素多種不良反應(yīng)的研究工作，目的在于探討TCDCA對糖皮質(zhì)激素類藥物引起的不良反應(yīng)的對抗作用及其對組織器官的保護(hù)作用。研究采用地塞米松誘導(dǎo)小鼠機(jī)體的多種不良反應(yīng)，TCDCA設(shè)計(jì)了0.05、0.1和0.2 g/kg三個(gè)低、中、高給藥劑量對小鼠灌胃給藥，主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面：
　　 ⑴TCDCA對糖皮質(zhì)激素引起免疫抑制小鼠的影響。通過免疫器官重量檢測，碳粒廓清法檢

3、測單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能，流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中CD4+、CD8+的百分率，ELISA檢測血清中IgG的含量，評價(jià)TCDCA對糖皮質(zhì)激素免疫抑制小鼠的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組相比較，TCDCA的三個(gè)劑量組能極顯著增大小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)(P<0.01)；0.05和0.1g/kg劑量組極顯著增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能(P<0.01)；三個(gè)劑量組顯著提高外周血中CD4+細(xì)胞百分率(P<0.05)，0.1g/kg劑量組顯著提高CD4

4、+與CD8+的比值(P<0.05)；0.05和0.1g/kg劑量組顯著提高小鼠血清中IgG含量(P<0.05)。說明TCDCA能增強(qiáng)糖皮質(zhì)激素免疫抑制小鼠的免疫功能。
　　 ⑵TCDCA對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腸黏膜損傷的影響。通過檢測小鼠采食量變化；放射免疫法檢測小腸局部sIgA含量；Real Time PCR檢測小腸細(xì)胞caspase-3mRNA的表達(dá)；EdU標(biāo)記法檢測小腸細(xì)胞增殖反應(yīng)；石蠟切片HE染色觀察小腸病理變化，評價(jià)TCD

5、CA對糖皮質(zhì)激素引起的腸黏膜損傷小鼠的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組相比較，0.1g/kg劑量組小鼠采食量極顯著增加(P<0.01)；0.05和0.2g/kg劑量組小腸sIgA含量顯著增加(P<0.05)，0.1g/kg劑量組小腸sIgA含量極顯著增加(P<0.01)；0.1g/kg劑量組小腸caspase-3 mRNA表達(dá)量為模型組50％；0.1g/kg劑量組小腸細(xì)胞增殖指數(shù)極顯著增加(P<0.01)；病理圖片可見給藥組小腸損傷明顯減輕

6、。說明TCDCA對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的小鼠腸黏膜損傷有保護(hù)作用。
　　 ⑶TCDCA對糖皮質(zhì)激素引起的腎上腺功能抑制小鼠的影響。通過ELISA檢測血清中皮質(zhì)酮含量；負(fù)重游泳應(yīng)激實(shí)驗(yàn)檢測小鼠抗應(yīng)激能力；TUNEL檢測腎上腺細(xì)胞的凋亡；EdU標(biāo)記法檢測腎上腺細(xì)胞的增殖；石蠟切片HE染色觀察腎上腺病理變化，評價(jià)TCDCA對糖皮質(zhì)激素引起的腎上腺功能受抑小鼠的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組相比較，0.1g/kg劑量組皮質(zhì)酮含量顯著增加(P<0

7、.05)；0.1g/kg劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間極顯著延長(P<0.01)，0.2g/kg劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間顯著延長(P<0.05)；0.1g/kg劑量組腎上腺細(xì)胞增殖指數(shù)極顯著增加(P<0.01)；0.1g/kg劑量組腎上腺細(xì)胞凋亡指數(shù)極顯著減少(P<0.01)；病理圖片可見給藥組腎上腺損傷明顯減輕。說明TCDCA對糖皮質(zhì)激素引起的小鼠腎上腺功能抑制有恢復(fù)作用。
　　 ⑷TCDCA對糖皮質(zhì)激素引起的小鼠骨質(zhì)疏松的影響。通過生

8、化分析儀檢測小鼠血清鈣、磷和堿性磷酸酶含量；放射免疫法檢測小鼠血清骨鈣素含量；對小鼠進(jìn)行全身X光掃描，X光圖片用ImageJ軟件分析股骨灰度值，間接測定骨密度，評價(jià)TCDCA對糖皮質(zhì)激素引起的骨質(zhì)疏松小鼠的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組相比較，TCDCA的三個(gè)劑量組能極顯著提高小鼠血清中堿性磷酸酶含量(P<0.01)；三個(gè)劑量組對血清鈣、磷含量無顯著性影響(P>0.05)；三個(gè)劑量組能極顯著提高血清骨鈣素含量(P<0.01)；三個(gè)劑量組小