觀察長期高脂飲食大鼠視網(wǎng)膜微血管的變化及吡格列酮干預療效.pdf

1、目的：近年來，脂代謝紊亂、肥胖因其可導致嚴重的心腦血管病變而影響人民健康，被日益受到關注。隨著研究的展開和深入，研究者發(fā)現(xiàn)肥胖、脂代謝紊亂對視網(wǎng)膜微血管也有影響。目前，有關高脂血癥、肥胖引發(fā)視網(wǎng)膜微血管損傷的具體機制尚不十分清楚。本實驗旨在探討長期高脂飼養(yǎng)建立的肥胖高脂伴胰島素抵抗SD大鼠模型視網(wǎng)膜微血管的變化以及缺氧誘導因子(hypoxia inducible factors，HIF)-1、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endo

2、thelial growth factor,VEGF)、細胞間粘附分子(intercellular adhension molecule，ICAM)-1以及轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor,TGF)-β mRNA的表達變化和吡格列酮的干預療效。 方法： 18周齡雄性SD大鼠隨機分為3組，正常對照組(NC)、高脂飼養(yǎng)組(HF)、高脂加吡格列酮干預組(HP)。NC組予正常飼料，HF組和HP組

3、予高脂飼料喂養(yǎng)，同時，HP組予吡格列酮15mg.kg-1.d-1劑量灌胃，NC組、HF組給予等劑量蒸餾水灌胃，每日一次。32周末收集24小時尿行24小時尿白蛋白定量檢測。2天后大鼠情況穩(wěn)定行正常血糖高胰島素鉗夾實驗評價外周胰島素抵抗程度。其余大鼠處死，采血檢測空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、血游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)等指標；取一側(cè)眼球固定行視網(wǎng)膜毛細血管鋪片PAS染色以及免疫組織化學染色，另一側(cè)分離視網(wǎng)膜組織采

4、用實時熒光定量PCR(Real-time PCR)方法測定三組大鼠視網(wǎng)膜組織HIF-1、VEGF、ICAM-1和TGF-βmRNA的表達情況。 2 統(tǒng)計學處理所有資料以SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析，首先用描述性統(tǒng)計和分析研究變量分布，符合正態(tài)分布的測定值以(-χ±s)表示，兩組間的比較采用t檢驗，多組間的比較采用方差分析。 結果： 1.從進入實驗第二周開始，高脂飼養(yǎng)組體重即開始增加，32周時，HF組和HP組大鼠體重、

5、內(nèi)臟脂肪重量及內(nèi)臟脂肪占體重百分比均明顯高于NC組(P均<0.01)。與NC組相比，HF組空腹血糖、胰島素、游離脂肪酸、甘油三酯、24h尿白蛋白定量水平均明顯升高，差別有統(tǒng)計學意義；HP組較HF組有所降低。 2.正常血糖高胰島素鉗夾實驗：與NC組相比，HF組的GIR顯著降低，穩(wěn)定狀態(tài)下平均GIR僅為(4.8±1.2)mg.min-1.kg-1，而NC組穩(wěn)定狀態(tài)下平均GIR為(11.3±1.7)mg.min-1.kg-1，差別有顯

6、著意義(P<0.01)，而HP組為(10.1±1.5)mg.min-1.kg-1，與NC組相比，差別有顯著意義(P<0.01)。 3.視網(wǎng)膜毛細血管鋪片-PAS染色顯示：NC組：動脈旁毛細血管網(wǎng)分布規(guī)則，動靜脈血管走形較直，毛細血管粗細均勻，內(nèi)皮細胞和周細胞規(guī)律分布，形態(tài)規(guī)則，周細胞內(nèi)皮細胞比例1.082；HF組：動脈旁毛細血管網(wǎng)分布較亂，走形不直，內(nèi)皮細胞增生，周細胞減少，且細胞形態(tài)不規(guī)則，還可見周細胞凋亡，白細胞聚集以及無細

7、胞毛細血管形成等現(xiàn)象，但未見影周細胞及微血管瘤形成，周細胞內(nèi)皮細胞比例0.483；HP組：動脈旁毛細血管網(wǎng)分布較規(guī)則，走形較直，內(nèi)皮細胞增生及周細胞減少現(xiàn)象均有所好轉(zhuǎn)，細胞形態(tài)亦較規(guī)則，未見無細胞毛細血管，周細胞內(nèi)皮細胞比例0.755。 4 視網(wǎng)膜毛細血管鋪片免疫組織化學染色：可見視網(wǎng)膜血管呈現(xiàn)棕黃色陽性著染，動靜脈染色深，微血管染色淺。HF組HIF-1、VEGF的表達比NC組明顯增強，HP組HIF-1、VEGF的表達比HF組明顯減弱，

8、有統(tǒng)計學差異。同時，HF組ICAM-1、TGF-B的表達比NC組明顯增強，HP組ICAM-1、TGF-β的表達介于NC組和HF組之間。 5 Real time-PCR檢測：與NC組相比，HF組HIF-1的表達升高34.15％，HP組與HF組相比下降10.65％；VEGF mRNA表達增高390％，HP組與HF組相比下降82.6％；HF組ICAM-1、TGF-βmRNA的表達分別增高20.6％、76.2％，HP組較HF組分別改善1

9、2.3％，40.6％。 結論： 1.SD大鼠經(jīng)過32周高脂飲食飼養(yǎng)后體重、內(nèi)臟脂肪重量及內(nèi)臟脂肪占體重百分比均明顯高于正常對照組。正糖高胰島素鉗夾顯示存在明顯胰島素抵抗。并且空腹血糖、胰島素、游離脂肪酸等也明顯升高。說明己成功建立具有高脂、肥胖、胰島素抵抗等特點的大鼠模型。 2.視網(wǎng)膜毛細血管鋪片PAS染色可見NC組周細胞減少，內(nèi)皮細胞增生、白細胞聚集、無細胞毛細血管形成，提示長期高脂飲食導致的高脂、肥胖、胰島素

10、抵抗可引起大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮損傷。 3 視網(wǎng)膜毛細血管鋪片免疫組織化學染色及Real-time PCR檢測結果提示長期高脂飲食誘導的高脂肥胖伴胰島素抵抗大鼠的視網(wǎng)膜微血管損傷的發(fā)生可能與HIF-1、VEGF、ICAM-1和TGF-β等細胞因子的激活有關。 4 吡格列酮作為過氧化物酶體增殖體活化受體(PPAR)-γ激動劑可能通過改善胰島素抵抗，保護血管內(nèi)皮細胞、降低HIF-1、VEGF、ICAM-1、TGF-β等細胞因子的表達從