沙立度胺對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分泌的影響.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌是女性生殖器官常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈持續(xù)的上升趨勢(shì)。盡管通過(guò)手術(shù)和放、化療能使早期子宮內(nèi)膜癌患者的生存率有明顯提高，但晚期子宮內(nèi)膜癌難以治愈的現(xiàn)實(shí)迫使人們探索新的治療手段。隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到：腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移與新生血管形成密切相關(guān)?？寡苄律委熂瘁槍?duì)血管形成的某些因子及其關(guān)鍵步驟進(jìn)行干預(yù)，從而阻斷腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞血供，使其進(jìn)入休眠狀態(tài)并誘導(dǎo)凋亡，有效阻止腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，達(dá)到治療

2、腫瘤的目的。目前抗血管生成治療已成為腫瘤治療的熱點(diǎn)。沙立度胺(Thalidomide，Thd)又名反應(yīng)停，是一種生物合成血管生成抑制劑，具有抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)活性和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。其已被用于多種實(shí)體瘤的Ⅰ、Ⅱ期臨床治療研究，但其對(duì)腫瘤血管生成抑制效應(yīng)及抗瘤效果很不一致，可能存在種屬和器官特異性。 本實(shí)驗(yàn)從基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)角度探討其在子宮內(nèi)膜癌治療中是否具有可行性，從而為子宮內(nèi)膜癌的治療提供一種新的有效的靶向治療藥物。

3、 材料和方法：人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株ishikawa用RPMI-1640培養(yǎng)液(含10％胎牛血清)，在37℃、飽和濕度、5％CO<,2>的條件下培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)。不同濃度的沙立度胺作用于ishikawa細(xì)胞，利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的生存抑制率；ELISA法檢測(cè)VEGF含量；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期。Giemsa染色后，倒置相差顯微鏡從形態(tài)上觀察細(xì)胞凋亡。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0版軟件包做統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)處理，均以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.01為有顯著性差異。 結(jié)果： 1 MTT：不同濃度沙立度胺對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株作用24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后，細(xì)胞增殖受到一定抑制，且呈時(shí)間和濃度依賴性。溶解沙立度胺所用的最高濃度的二甲基亞楓(DMSO)對(duì)細(xì)胞的增殖無(wú)影響(P>0.05)。沙立度胺作用24小時(shí)后，25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml、400 μg/ml濃度組的抑制率分

5、別為11.90％、17.14％、28.90％、39.24％、51.00％；作用48小時(shí)后，抑制率分別為16.64％、27.1％、39.69％、49.64％、58.18％；作用72小時(shí)后，抑制率分別為26.48％、35.92％、45.63％、56.76％、62.82％。 2 沙立度胺對(duì)ishikawa細(xì)胞系VEGF分泌量的影響：根據(jù)人VEGF-ELISA試劑盒說(shuō)明配制標(biāo)準(zhǔn)品及繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出不同濃度沙立度胺及作用不同時(shí)間的ish

6、ikawa細(xì)胞系VEGF分泌量(pg/ml)結(jié)果示：在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)中，各個(gè)濃度(25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml、400μg/ml)組間及與對(duì)照組間均有顯著性差異(P<0.01)，分別為356.7±2.5、299.3±2.4、242.8±1.6、180.3±2.0、135.7±2.2、411.5±3.1：320.4±1.6、271.7±3.1、207.7±2.5、153.4±

7、2.9、107.4±2.1、418.54-2.7：307.5±1.4、250.7±1.0、192.3±2.5、129.1±1.6、92.1±2.0、416.1±2.4。對(duì)照組在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而各個(gè)濃度組在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間均具有顯著性差異(P<0.01)。 3 沙立度胺作用于細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)變化：對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)飽滿，細(xì)胞核染色均勻呈圓形或橢圓形，核仁清晰可見(jiàn)；沙立度胺作用48小時(shí)后，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)濃縮，變圓，細(xì)胞

8、核濃縮、核碎裂等細(xì)胞凋亡特征性形態(tài)學(xué)改變，但未見(jiàn)大量凋亡小體，隨著作用濃度的增加活細(xì)胞越少，’并且上述現(xiàn)象越明顯。 4 沙立度胺對(duì)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的影響：不同濃度(50 μg/ml、100 μ/ml、200 μg/ml)組作用48小時(shí)后，Ishikawa細(xì)胞的凋亡率分別為(7.96±0.29)％、(12.14±0.77)％、(19.06±0.39)％，而空白對(duì)照組的凋亡率為(2.59±0.47)％，四組間相比較均有顯著性差異

9、(P<0.01)；G0-G1期細(xì)胞百分率分別為(44.75±1.54)％、(46.45±0.81)％、(52.45±1.84)％、(40.38±1.54)％，不同濃度沙立度胺組與空白對(duì)照組間均有顯著性差異(P<0.01)，而50 μg/ml組與100 μg/ml組間無(wú)差別(P>0.05)；S期的分別為(41.40±1.34)％、(26.55±1.21)％、(19.75±1.05)％、(51.80±1.81)％，四組間相比較均有顯著性差別

10、(P<0.01)；G2-M期分別為(13.85±0.68)％、(27.00±1.53)％、(27.85±1.99)％、(7.81±0.52)％，不同濃度沙立度胺組與空白對(duì)照組間均有顯著性差異(P<0.01)，而100 μg/ml組與200 μg/ml組間無(wú)差別(P>0.05)；細(xì)胞增殖指數(shù)分別為：(55.25±0.71)％、(53.55±0.81)％、(47.55±1.84)％、(59.61±1.55)％，不同濃度沙立度胺組與空白對(duì)照組

11、間均有顯著性差異(P<0.01)，而50 μg/ml組與100 μg/ml組間無(wú)差別(P>0.05)。 結(jié)論： 1 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株ishikawa在體外能夠分泌VEGF，并且沙立度胺對(duì)ishikawa細(xì)胞增殖和分泌VEGF的水平均有明顯的抑制作用，呈時(shí)間濃度依賴性。這將為沙度胺的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及臨床運(yùn)用提供理論依據(jù)。 2 沙立度胺可以通過(guò)誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜癌ishikaWa細(xì)胞凋亡和G1期生長(zhǎng)阻滯而發(fā)揮直接的抗腫瘤效應(yīng)