常氧和低氧條件下,人喉鱗癌細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長因子對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的:頭頸腫瘤同其它大多數(shù)實體腫瘤一樣,瘤體內(nèi)的部分細(xì)胞處于缺氧環(huán)境之中。實體腫瘤持續(xù)性生長和轉(zhuǎn)移需要有新生血管的形成,以新生血管為靶點(diǎn)對實體腫瘤進(jìn)行生物學(xué)治療已成為近些年來新的研究熱點(diǎn)。本實驗利用人喉鱗癌(Hep-2)細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human UmbilicalVein Endothelia Cell,HUVEC),研究在簡單模擬實體瘤內(nèi)部常氧和低氧條件(Hypoxia Inducible Factor1 alpha,HIF

2、-1α)下,與喉鱗癌血管生成相關(guān)的三個指標(biāo)VEGF(vascular endothelial growth factor),Flt-1(vascularendothelial growth factor receptor1),KDR(vascular endothelial growthfactor receptor2)的表達(dá),探討各個蛋白在喉鱗癌轉(zhuǎn)移過程中的確切作用,為頭頸腫瘤的治療奠定實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　

3、1、Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)于含10％新生小牛血清、青霉素(100U/mL)、鏈霉素(100μg/mL)的RPMI-1640培養(yǎng)基中,常規(guī)傳代培養(yǎng),置于37℃,5％CO2,20％O2(常氧)或37℃,5％CO2,2％O2,93％N2(低氧)的培養(yǎng)箱中。
　　 2、待Hep-2細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后,將細(xì)胞分為2組:A組(常氧24h組)、B組(低氧24h組)。收集各組細(xì)胞培養(yǎng)上清,用于刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長。免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測人臍靜脈

4、內(nèi)皮細(xì)胞Fit-1、KDR蛋白表達(dá)。MTT法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖情況。
　　 3、待Hep-2細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后,將細(xì)胞分為2組:A組(常氧3h組、常氧6h組、常氧12h組、常氧24h組、常氧48h組)、B組(低氧3h組、低氧6h組、低氧12h組、低氧24h組、低氧48h組)。收集各組細(xì)胞及其培養(yǎng)上清,ELISA法檢測各組細(xì)胞及其培養(yǎng)上清VEGF蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果.Fl

5、t-1、KDR蛋白主要位于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿和胞核,呈棕黃色,且低氧48h上清刺激組高于常氧48h上清刺激組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、MTT結(jié)果:Hep-2細(xì)胞常氧上清和低氧上清均能刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長。低氧上清組四個時間組(48h、72h、96h、120h)刺激效果均高于常氧組相應(yīng)各時間(48h、72h、96h、120h),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、ELISA結(jié)果:VEG