IL-6基因啟動子區(qū)-572G-C、-597G-A多態(tài)性的實時熒光PCR檢測及其與漢族人冠心病的關系.pdf

1、目的: 為了研究IL-6基因多態(tài)性與心血管病的相關性，根據(jù)熒光共振能量轉移和溶點曲線分析原理，建立了一種IL-6基因快速分型的實時熒光分析方法。并通過對中國北方地區(qū)漢族人IL-6基因啟動子區(qū)-572G/C，-597G/A多態(tài)性與體重指數(shù)(BMI)和炎癥因子等生化指標的相關性的調查，探索基因多態(tài)性與冠心病(CHD)發(fā)生發(fā)展的關系。 方法: 利用實時熒光PCR方法檢測我國北方地區(qū)漢族人群IL-6基因啟動子-572G/

2、C，-597G/A的多態(tài)性。甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)采用酶法測定。高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)采用均相酶法測定。脂蛋白a[Lp(a)]、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白A2(ApoA2)、載脂蛋白B(ApoB)、載脂蛋白C2(ApoC2)、載脂蛋白C3(ApoC3)、載脂蛋白E(ApoE)采用免疫透射比濁法測定。超敏C反應蛋白(hsCRP)采用顆粒增強的免疫散射比濁法測定。白細胞介素-6(IL

3、-6)采用細胞因子芯片檢測。通過實時熒光PCR方法、直接DNA測序、聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)三種檢測方法的比較，分析其對77例樣本檢測結果的一致性。 結果: 一、在國內首次成功建立了同時檢測IL-6基因啟動子區(qū)一572G/C、-597G/A多態(tài)性的實時熒光PCR檢測方法。用DNA測序方法驗證檢測結果正確。經(jīng)對中國北方地區(qū)漢族123例健康對照和194例冠心病患者的IL-6基因檢測，發(fā)現(xiàn)在-597位點僅

4、有兩種基因型，為GG型和GA型，尚未發(fā)現(xiàn)AA型。-572位點有三種基因型，分別為GG，GC，CC型。其中-597GA型為國內首次報道。 二、實時熒光PCR方法、直接DNA測序、RFLP三種檢測方法的比較分析發(fā)現(xiàn)：在77例樣本中，采用實時熒光PCR方法與直接DNA測序相比僅有3例結果不一致。77例PCR產(chǎn)物用限制性內切酶。BsrBI酶切，有20例與實時熒光PCR方法結果不一致。當PCR產(chǎn)物用限制性內切酶FokI酶切時，僅有5例是G

5、A型，另外兩例未被檢測出。 三、統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)IL-6基因啟動子區(qū)-572G/C基因型頻率和等位基因頻率在冠心病組和對照組中的分布差異無統(tǒng)計學意義。攜帶G等位基因(GG+GC)和非G等位基因(CC)頻率在冠心病組和對照組中的差異有統(tǒng)計學意義。在正常對照組中，與非G等位基因相比，攜帶G等位基因組的收縮壓中位數(shù)水平顯著升高。在所有觀測對象中，與非G等位基因相比，攜帶G等位基因組的BMI、hsCRP、收縮壓中位數(shù)水平顯著升高。

6、四、Logistic回歸分析顯示，ApoC2、TH、lip(a)、年齡、TG、性別、高血壓是本研究對象冠心病發(fā)生的獨立危險因素，ApoAl是保護因子，未見G等位基因是一個獨立的危險因子。 結論: 實時熒光PCR方法在30分鐘內能夠完成32例樣本兩個位點的同時檢測。與DNA測序、RFLP方法相比，具有簡單、準確、快速的特點，便于臨床實驗室大規(guī)模樣本篩查。本研究未發(fā)現(xiàn)IL-6基因啟動子區(qū)-597G/A多態(tài)性與CHD的易感性有