吳茱萸堿對人前列腺癌DU145細胞的體外作用及其機制的研究.pdf

1、目的:在體外研究吳茱萸堿(evodiamine，evo)對人前列腺癌DU145細胞增殖、凋亡的影響，并探討其可能作用機制。
　　 方法:細胞培養(yǎng)技術體外培養(yǎng)人前列腺癌DU145細胞，用不同濃度的吳茱萸堿進行干預。MTT法檢測各濃度吳茱萸堿對人前列腺癌DU145細胞增殖的影響;流式細胞術測定吳茱萸堿對細胞周期和凋亡的影響;倒置光學顯微鏡下觀察DU145細胞形態(tài)變化;免疫細胞化學法檢測前列腺癌DU145細胞內PCNA的表達情況;We

2、sternBlot方法檢測t-ERK、p-ERK及CleavedCaspase-3的表達。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理所得結果，以P＜0.05為顯著性檢驗水準。
　　 結果:
　　 1.吳茱萸堿對DU145細胞增殖具有抑制作用:MTT顯示，DU145細胞增殖活力被吳茱萸堿所抑制(P＜0.05)。Western印跡及免疫細胞化學染色結果顯示，DU145細胞經(jīng)過吳茱萸堿處理后細胞內增殖標志物PCNA表達降低，細胞內總的ER

3、K1/2蛋白表達水平無明顯變化，而磷酸化ERKl/2蛋白與對照組相比水平下降。
　　 2.吳茱萸堿對DU145細胞周期的影響:流式細胞分析技術結果顯示，經(jīng)過吳茱萸堿作用24小時后各個濃度組(10-7M、106M、10-5M)所處理結果顯示各周期內的細胞數(shù)量發(fā)生明顯變化，其中G1、S期細胞明顯減少而G2/M期細胞積累增多，其差異有統(tǒng)計學意義，即吳茱萸堿使DU145細胞增殖阻滯于G2/M期。
　　 3.吳茱萸堿可誘導DU14

4、5細胞凋亡:流式細胞分析技術結果顯示，吳茱萸堿各濃度組(10-7M、10-6M、10-5M)作用于DU145細胞72h后，凋亡細胞明顯增多，且凋亡率隨著藥物濃度的增加而增加，呈現(xiàn)藥物濃度依賴方式，經(jīng)過各濃度組吳茱萸堿處理后的DU145細胞所測得的凋亡率結果差異使用單因素方差分析有顯著性差異(P＜0.05)。Western印跡結果表明，不同濃度吳茱萸堿處理DU145細胞24小時后，CleavedCaspase-3的相對表達量明顯升高，并隨