乳化異氟醚后處理對在體兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制.pdf

1、目的：乳化異氟醚是已獲國家Ⅱ類新藥認(rèn)證的新型麻醉藥，經(jīng)靜脈注射具有可靠的安全性和有效性，兼具靜脈麻醉藥與揮發(fā)性麻醉藥的優(yōu)點，具有良好的臨床開發(fā)前景。研究表明，乳化異氟醚預(yù)處理具有心肌保護作用，但乳化異氟醚后處理對心肌缺血再灌注損傷影響的研究國內(nèi)外尚無報道，本研究旨在觀察乳化異氟醚后處理對在體兔缺血后心肌損傷的影響并初步探討其作用機制。
　　 方法：雄性新西蘭白兔，體重2.5～3.0 kg，通過結(jié)扎和開放左冠狀動脈前降支建立在體兔

2、心肌缺血再灌注損傷的動物模型。研究內(nèi)容分為三個部分：第一部分,探討乳化異氟醚后處理對心肌缺血再灌注損傷的影響，成功建立模型的新西蘭白兔38只隨機分為5組：缺血對照組(CON，n=8)于再灌注前5min靜脈給予0.9％生理鹽水2 ml；缺血后處理組(IPO，n=8)于缺血30 min后，再灌注20 s，缺血20 s,連續(xù)3次，然后再灌注180 min；0.5MAC乳化異氟醚后處理組（LEPO，n=7）于再灌注前3 min時靜脈注射(1 m

3、l·s-1)乳化異氟醚4～6 ml至呼氣未異氟醚濃度為0.5MAC(1.0 MAC=1.28％)，然后以4～6 ml·kg-1·h-1靜脈輸注乳化異氟醚維持呼氣末濃度0.5MAC至再灌注后2 min；1.0 MAC乳化異氟醚后處理組（HEPO，n=8）于再灌注前3 min時靜脈注射(1 ml·s-1)乳化異氟醚8～10 ml至呼氣未濃度為1.0MAC，然后以6～8 ml·kg-1·h-1靜脈輸注乳化異氟醚維持呼氣末濃度1.0 MAC至再

4、灌注后2 min；脂肪乳組（INT，n=7）于再灌注前3 min時靜脈注射(1 ml·s-1)脂肪乳9 ml，然后以7 ml·kg-1·h-1持續(xù)輸注脂肪乳至再灌注后2 min。第二部分，于1.0 MAC乳化異氟醚后處理組分別加入兩種KATP通道阻滯劑，探討線粒體KATP通道在乳化異氟醚后處理心肌保護中的作用。實驗分為Glibenclamide (GLI,非選擇性KATP通道阻滯劑)+HEPO組（GLI+HEPO,n=8）和5-hydr

5、oxydecanoate (5-HD,線粒體KATP通道阻滯劑)+HEPO組（5-HD+HEPO，n=7），另設(shè)GLI組（n=7）、5-HD組（n=8）和Dimethylsulfoxide組(DMSO，n=7）。第三部分，探討乳化異氟醚后處理對缺血后心肌細胞凋亡的影響。實驗分為假手術(shù)組（Sham）：僅在左冠狀動脈前降支下穿線，不結(jié)扎；CON組、HEPO組和INT組，方法同上，每組5只。再灌注180 min時取左室心肌組織，末端脫氧核苷酸

6、轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的生物素脫氧尿苷三磷酸原位切口末端標(biāo)記法（TUNEL）觀察心肌細胞凋亡、免疫組化測定心肌組織Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。觀察指標(biāo)包括血流動力學(xué),血清肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性,心肌梗死面積以心肌梗死區(qū)(IS)重占心肌缺血區(qū)(AAR)重的百分比表示，計算心肌細胞凋亡指數(shù)（AI）和Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。
　　 結(jié)果：血流動力學(xué)：與基礎(chǔ)值比較，各組再灌注期間HR、MAP、RPP值均明顯下降(

7、P<0.05),組間比較各組血流動力學(xué)指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05)。心肌梗死面積：各組心肌LV重、AAR重及AAR/LV差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）。與CON組比較，IPO組和HEPO組心肌梗死面積明顯縮小（ P<0.05），LEPO組、INT組、GLI組、5-HD組和DMSO組心肌梗死面積差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）；IPO組、HEPO組兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）；與HEPO組比較，GLI

8、+HEPO組、5-HD+EPO組心肌梗死面積明顯增大(P<0.05)。CK和LDH活性：與CON組比較，IPO組和HEPO組CK、LDH活性均明顯降低（ P<0.05），LEPO組、INT組、GLI組、5-HD組和DMSO組CK、LDH活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）；IPO組和HEPO組兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）；與HEPO組比較，GLI+HEPO組、5-HD+EPO組CK、LDH活性明顯升高(P<0.05

9、)。心肌細胞凋亡指數(shù)（AI）：與Sham組比較，CON組、HEPO組和INT組AI明顯增高(P<0.05)，與CON組和INT組比較，HEPO組AI明顯降低(P<0.05)。Bcl-2和Bax蛋白表達情況：與Sham組比較，CON組、HEPO組和INT組Bcl-2、Bax表達及Bcl-2/Bax比值均明顯增加(P<0.05)；與CON組和INT組比較，HEPO組Bcl-2表達、Bcl-2/Bax比值明顯增加(P<0.05)、Bax蛋白表