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文檔簡介
1、肺炎克雷伯桿菌是一種常見的條件致病菌,近年來,引起醫(yī)院內(nèi)感染的發(fā)病率越來越高,尤其是兒童、老年人和抵抗力低的人群。喹諾酮類抗菌素作為治療肺炎克雷伯桿菌感染的常用藥,由于廣泛地使用,甚至濫用,耐藥性也呈逐年升高的趨勢,給臨床治療帶來了很大的困難,甚至治療失敗。研究耐喹諾酮肺炎克雷伯桿菌對其它抗菌素的抗菌活性及對氟喹諾酮耐藥機(jī)制的分析,對臨床治療耐喹諾酮肺炎克雷伯桿菌引起的感染和開發(fā)新的喹諾酮類藥物有著重要意義。 為了研究耐喹諾酮肺
2、炎克雷伯桿菌對其他抗菌素的抗菌活性,從100株肺炎克雷伯桿菌中選取對環(huán)丙沙星耐藥(MIC≥4mg/L)菌株14株。采用瓊脂二倍稀釋法測定對抗菌素的最低抑菌濃度(MIC),同時(shí)做了泵抑制劑羰基氰氯苯腙(CCCP)的逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)。MIC測定結(jié)果顯示,14株肺炎克雷伯桿菌對5種喹諾酮類藥物無一株敏感,且表現(xiàn)出較高水平的耐藥。對其它抗生素的耐藥率由高到低依次是氨芐西林、哌拉西林、氯霉素、慶大霉素、氨曲南、阿米卡星、頭孢噻肟和頭孢吡肟,而對于亞胺培南
3、未發(fā)現(xiàn)有耐藥株。 其中有一株肺炎克雷伯桿菌在單用5種氟喹諾酮類藥物及與CCCP合用后,MIC值降低了8~32倍;有兩株肺炎克雷伯桿菌分別對環(huán)丙沙星及左氧氟沙星所測的MIC值降低了32倍和4倍;還有一株對左氧氟沙星和司帕沙星在使用CCCP前后的MIC也降低了4倍。 為了研究肺炎克雷伯桿菌對氟喹諾酮的耐藥機(jī)制,從耐藥株中選取了5株菌,提取基因組DNA,通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增gyrA基因和parC基因,擴(kuò)增產(chǎn)物片段長度分
4、別為625、319bp,經(jīng)純化后測序。并提取了14株耐藥菌株的質(zhì)粒DNA,通過PCR擴(kuò)增qnr基因片段。結(jié)果顯示,5株耐氟喹諾酮肺炎克雷伯桿菌的gyrA和parC基因經(jīng)測序分析,顯示gyrA的第83位(TCC→ATC/TTG)均出現(xiàn)了突變,突變引起了相應(yīng)氨基酸的改變(Ser-83→Ile/Leu)。其中有兩株同時(shí)也出現(xiàn)了第87位點(diǎn)(GAC→AAC)和第193位點(diǎn)(GGC→AAA)的改變,氨基酸也由Asp→Asn、Gly→Lys。parC
5、有4株出現(xiàn)了第80位點(diǎn)突變(AGC→ATC),引起氨基酸由Ser→Ile的改變。質(zhì)粒DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增qnr基因瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果呈陰性。 綜上所述得出,耐氟喹諾酮肺炎克雷伯桿菌對喹諾酮類抗菌素呈交叉耐藥,且呈現(xiàn)出較高水平的耐藥;亞胺培南對耐喹諾酮肺炎克雷伯桿菌高度敏感;第三代頭孢菌素、氨曲南和阿米卡星仍有一定作用。gyrA和parC基因的突變是肺炎克雷伯桿菌對氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥機(jī)制的主要原因;主動外排機(jī)制是肺炎克雷伯桿菌耐
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