孕激素緩釋微球的研制及其局部應(yīng)用對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用.pdf

1、研究背景:
　　子宮內(nèi)膜異位癥是一種難以治愈的常見(jiàn)婦科良性疾病，而妊娠是對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥極為有效的自然療法，假孕療法就是用藥物模擬妊娠的機(jī)體內(nèi)環(huán)境，從而達(dá)到治療目的。然而，全身應(yīng)用孕激素的副作用多，包括惡心、痤瘡、體重增加、水鈉潴留、突破性出血、肝功能異常及血栓形成等?；颊叩囊缽男暂^差，常常半途而廢，極大地影響了治療效果。同時(shí)常規(guī)假孕療法病灶局部的藥物濃度低，對(duì)卵巢內(nèi)膜異位囊腫等病變的治療效果差。
　　為了提高療效同時(shí)降低副

2、作用，我們提出誘導(dǎo)局部假孕治療子宮內(nèi)膜異位癥的假說(shuō)。即制備一種可長(zhǎng)期緩釋孕激素的生物降解型微球，注射到子宮內(nèi)膜異位癥病灶局部，在病灶局部形成高濃度孕激素的環(huán)境，誘導(dǎo)出高度假孕狀態(tài)，使異位內(nèi)膜病灶萎縮、壞死并吸收，從而提高療效；而血藥濃度低，對(duì)代謝及卵巢功能影響小,可減少常規(guī)假孕療法的副作用。
　　研究目的:
　　1.設(shè)計(jì)一種可注射并長(zhǎng)期緩釋孕激素的生物降解型微球；
　　2.通過(guò)自體移植子宮內(nèi)膜建立兔及大鼠子宮內(nèi)膜異位癥

3、動(dòng)物模型；
　　3.在兔內(nèi)異癥模型上觀察孕激素緩釋微球局部應(yīng)用的療效與副作用；
　　4.在大鼠皮下內(nèi)異癥模型上觀察單次局部注射孕激素緩釋微球療效的維持時(shí)間，并與GnRHa的療效相比較。
　　研究方法與結(jié)果:
　　第一部分:孕激素緩釋微球的制備及特性檢測(cè)
　　采用油/水復(fù)乳液中蒸發(fā)法制備左炔諾孕酮聚乳酸微球，并檢測(cè)了微球表面性狀、粒徑分布、注射性、載藥率、體外釋藥及降解。通過(guò)優(yōu)化含藥量、蒸發(fā)溫度和蒸發(fā)攪拌速度

4、改善載藥微球的表面性狀、減少載藥微球的突釋效應(yīng)。
　　含藥量嚴(yán)重影響載藥微球的表面性狀，當(dāng)分散相含藥量在5％及以下時(shí)，載藥微球表面相對(duì)光滑；而含藥量在10％及以上時(shí)，載藥微球的表面粗糙，有藥物微晶體黏附，部分微球開(kāi)裂；蒸發(fā)溫度也對(duì)載藥微球的表面性狀有一定的影響，在常溫下（25℃左右）制備的載藥微球表面粗糙有裂紋，而在冰浴條件(0-4)℃下制備的載藥微球表面相對(duì)光滑；蒸發(fā)攪拌速度是微球表面性狀的另一影響因素，低速攪拌蒸發(fā)制備的載藥微

5、球表面光滑，但部分微球出現(xiàn)融合現(xiàn)象，中速攪拌蒸發(fā)制備的載藥微球表面光滑，形狀規(guī)則，無(wú)融合現(xiàn)象，而高速攪拌蒸發(fā)制備的載藥微球表面粗糙，大小不一，形狀不規(guī)則。體外釋藥曲線顯示優(yōu)化組合條件下制備的載藥微球突釋效應(yīng)最小，釋藥最平穩(wěn)，最接近零級(jí)釋放。
　　掃描電鏡顯示優(yōu)化組合條件下制備的載藥微球表面非常光滑致密，無(wú)孔隙裂紋，粒徑分布在45μm左右（45.18±8.96μm），適合18G-23G的針頭注射，但對(duì)細(xì)于26G的針頭不具備通針性。含

6、藥量在(37.5±1.4)％，經(jīng)過(guò)6個(gè)月的體外降解，微球僅僅出現(xiàn)粘連和融合，但仍保持原有形狀。
　　第二部分：子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型的建立
　　對(duì)45只雌性新西蘭大白兔行開(kāi)腹手術(shù)，切除左側(cè)子宮并縱形剖開(kāi)，剝除肌層及漿膜層，修整成0.5×0.5cm大小的組織，6-0絲線縫合至腹膜壁層，兩個(gè)月后，內(nèi)膜移植物從腹腔凸起并形成血管化的囊腫，動(dòng)情周期未受影響，囊腫的組織與結(jié)構(gòu)和人內(nèi)膜異位囊腫相似。
　　對(duì)25只雌性SD大鼠行開(kāi)腹

7、手術(shù)，切除左側(cè)子宮并縱形剖開(kāi)，剝除肌層及漿膜層，修整成4塊0.5×0.5cm大小的組織，放置在大鼠下腹部皮下，兩個(gè)月后，皮下內(nèi)膜移植物變成紫藍(lán)色的囊腫，動(dòng)情周期未受影響，囊腫的組織與結(jié)構(gòu)和人內(nèi)膜異位囊腫相似。
　　第三部分：孕激素緩釋微球兔內(nèi)膜異位囊腫內(nèi)注射的藥理藥效學(xué)研究
　　將兔內(nèi)膜異位模型隨機(jī)化分為5組，分別接受局部假孕治療（即將孕激素緩釋微球注射到內(nèi)膜異位囊腫內(nèi)）、局部空白微球治療（即將空白微球注射到內(nèi)膜異位囊腫內(nèi)）

8、和系統(tǒng)假孕治療（即反復(fù)皮下注射孕激素）。并設(shè)去勢(shì)組作為陽(yáng)性對(duì)照，空白對(duì)照組作為陰性對(duì)照。與系統(tǒng)假孕組相比，局部假孕組血藥曲線平穩(wěn)，血藥濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于系統(tǒng)假孕組(P<0.01)，而囊腫內(nèi)藥物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于系統(tǒng)假孕組(P<0.01)，一次給藥可維持6個(gè)月。
　　治療6個(gè)月后，對(duì)照組和空白微球組的內(nèi)膜異位囊腫明顯增大(P<0.01)，系統(tǒng)假孕組內(nèi)膜異位囊腫無(wú)顯著變化，而局部假孕組和去勢(shì)組內(nèi)膜異位囊腫顯著減小(P<0.01)。系統(tǒng)假孕組內(nèi)膜異

9、位囊腫僅僅發(fā)生分泌性改變，而局部假孕組與去勢(shì)組內(nèi)膜異位囊腫發(fā)生高度萎縮。
　　同時(shí)，系統(tǒng)假孕組轉(zhuǎn)氨酶、血脂、血糖和體重增加均顯著升高，而局部假孕組對(duì)各代謝指標(biāo)無(wú)明顯影響。系統(tǒng)假孕組排卵受到抑制，無(wú)動(dòng)情周期，而局部假孕組動(dòng)情周期未受影響。
　　第四部分：孕激素緩釋微球囊內(nèi)單次注射對(duì)大鼠皮下內(nèi)膜異位囊腫療效的長(zhǎng)期觀察
　　將大鼠皮下內(nèi)膜異位模型隨機(jī)化分為3組，分別接受局部假孕治療（即將孕激素緩釋微球注射到內(nèi)膜異位囊腫內(nèi)）和

10、6個(gè)月的GnRHa治療，并設(shè)空白對(duì)照組。每月測(cè)量囊腫最大徑變化，連續(xù)陰道涂片觀察性周期變化。治療后第6、12月取血樣和內(nèi)膜異位囊腫，觀察代謝指標(biāo)變化、囊腫組織學(xué)變化、雌/孕激素受體的表達(dá)變化。
　　治療6個(gè)月后，局部假孕治療和GnRHa治療均引起內(nèi)膜異位囊腫顯著萎縮(P<0.01)。局部假孕組雌孕激素受體表達(dá)普遍減弱(P<0.01)；而GnRHa組雌激素受體表達(dá)普遍增強(qiáng)(P<0.01)，孕激素受體在上皮的表達(dá)也顯著增強(qiáng)(P<0.0

11、1)。之后，局部假孕組囊腫仍保持萎縮狀態(tài)，而GnRHa組囊腫在停藥后快速增長(zhǎng)，于第9月達(dá)到治療前的水平并保持到第12月。局部假孕組雌/孕激素受體的表達(dá)在第12月仍低于對(duì)照組水平，而GnRHa組雌/孕激素受體的表達(dá)在第12月與對(duì)照組無(wú)顯著差異。局部假孕治療和GnRHa治療對(duì)各代謝指標(biāo)均無(wú)顯著影響。局部假孕組動(dòng)情周期正常，而GnRHa組在治療后6至7個(gè)月無(wú)動(dòng)情周期。
　　結(jié)論:
　　1.優(yōu)化組合條件下制備的孕激素緩釋微球表面性狀

12、最好，突釋效應(yīng)最小，最接近零級(jí)釋放，在體外條件下一次給藥可釋藥長(zhǎng)達(dá)7個(gè)月，適合常規(guī)注射。
　　2.自體移植子宮內(nèi)膜組織可成功建立兔及大鼠內(nèi)異癥動(dòng)物模型，兔模型適合研究孕激素緩釋微球局部應(yīng)用的療效和藥物代謝特點(diǎn)；大鼠皮下模型適合研究孕激素緩釋微球單次應(yīng)用療效的維持時(shí)間和局部作用的機(jī)制。
　　3.孕激素緩釋微球局部應(yīng)用后，病變局部藥物濃度高，使內(nèi)膜異位囊腫發(fā)生高度萎縮，治療效果與去勢(shì)相當(dāng)，顯著優(yōu)于全身用藥；而血藥濃度低，無(wú)明顯的