尼古丁對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥腹腔微環(huán)境影響的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 流行病學(xué)研究提示，吸煙能降低子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病。既往研究表明，尼古丁能抑制雌激素合成酶芳香化酶的活性，然而吸煙婦女血雌激素濃度并沒(méi)有降低到內(nèi)異癥臨床藥物治療所達(dá)到的近似絕經(jīng)期的水平，因此這不能完全解釋吸煙對(duì)內(nèi)異癥發(fā)病的影響，可能還存在其他的潛在機(jī)制。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，觀察尼古丁對(duì)內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖的影響，尼古丁和/或雌激素對(duì)內(nèi)異癥患者腹腔巨噬細(xì)胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞分別培養(yǎng)和共同培養(yǎng)分泌炎性細(xì)胞因子TNF-

2、α和IL-8的影響以及對(duì)煙堿受體和雌激素受體表達(dá)的影響，從而探討尼古丁對(duì)內(nèi)異癥的腹腔炎性微環(huán)境的影響，初步探討吸煙降低內(nèi)異癥發(fā)病的可能機(jī)制。 材料與方法： 1．經(jīng)過(guò)本院倫理委員會(huì)討論和病人知情同意后，收集子宮內(nèi)膜異位癥患者(主要是卵巢內(nèi)膜樣囊腫患者)的腹腔液分離培養(yǎng)腹腔巨噬細(xì)胞；收集子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜組織分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞：兩種細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)與共培養(yǎng)，并用免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定；用MTT法檢測(cè)不同濃度尼古丁對(duì)

3、子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響； 2．在腹腔巨噬細(xì)胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)液中，加入不同處理因素(不同濃度的尼古丁，雌激素，以及尼古丁和雌激素共同作用)，再加入脂多糖刺激，收集不同時(shí)間點(diǎn)(6h，12h，24h，48h，72h)的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用酶聯(lián)免疫法測(cè)定TNF-α和IL-8的濃度； 3．用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定，原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細(xì)胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的煙堿受體α7亞型(α7 nAChR)和雌激素受體α(ERα)的細(xì)胞定

4、位。 原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細(xì)胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中，加入尼古丁、雌激素，作用24h后，提取蛋白，用Western Bloaing檢測(cè)α7 nACR和ERα表達(dá)的改變。 結(jié)果： 1．尼古丁對(duì)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖沒(méi)有明顯影響； 2．尼古丁對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-8有抑制作用，雌激素存在時(shí)，這種抑制作用仍然存在； 3．尼古丁對(duì)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞分泌TNF-α有抑制作用，對(duì)IL-8分泌沒(méi)有明顯影響

5、； 4．尼古丁對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)分泌TNF-α和IL-8有抑制作用，雌激素存在時(shí)，這種抑制作用仍然存在； 5．腹腔巨噬細(xì)胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞具有α7 nAChR和ERα的表達(dá)，分別定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞核； 6．尼古丁隨濃度升高能促進(jìn)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞α7 nAChR和ERα的表達(dá)，與雌激素共同作用時(shí)，兩種受體表達(dá)降低； 7．尼古丁能促進(jìn)巨噬細(xì)胞α7 nAChR的表達(dá)，而抑制ERα的表達(dá)