一株用于生物防治的Burkholderia菌的基因改造和生長(zhǎng)條件研究.pdf

1、Burkholderia菌是一種能夠?qū)拐婢『Φ男滦蜕镛r(nóng)藥，它能產(chǎn)生多種抗生素對(duì)付真菌感染?，F(xiàn)從土壤中分離出一株BurkholderiaKDMD。根據(jù)PseudomonasaeruginosahcnABC基因序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增出hcnABC基因的2.1kb片段和1.6kb片段。然后用BamHⅠ和PstⅠ雙酶切2.1kb片段和Pucp26質(zhì)粒，將2.1kb片段連接到Pucp26質(zhì)粒上，因?yàn)镻ucp26含有LacZ基因，所以用藍(lán)白選擇法

2、篩選出陽(yáng)性單菌落，酶切檢驗(yàn)；接著用HindⅢ和PstⅠ雙酶切1.6kb片段和上一步連接好的Pucp26質(zhì)粒，組成完整的hcnABC基因。培養(yǎng)基選用LB培養(yǎng)基，pH值調(diào)為7.0，溫度分別選用25℃、30℃、37℃和42℃，搖床轉(zhuǎn)速為200r/min，每隔2小時(shí)測(cè)量一次OD600值，繪制BurkholderiaKDMD不同溫度的生長(zhǎng)曲線，確定37℃為最佳培養(yǎng)溫度；培養(yǎng)基選用LB培養(yǎng)基，溫度選用37℃，pH值分別選用pH4.5，pH5.0，p

3、H5.5，pH6.0，pH6.5，pH7.0，pH7.5，pH8.0，pH8.5，每隔2小時(shí)測(cè)量一次OD600值，繪制KDKD不同pH值的生長(zhǎng)曲線，確定pH6.0最佳pH值；選用M9作為基本培養(yǎng)基，氮源選用0.1％的酵母粉，碳源選用1％蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖和淀粉，37℃，pH7.0條件下培養(yǎng)，每隔2小時(shí)測(cè)量一次OD600值，繪制BurkholderiaKDMD不同碳源的生長(zhǎng)曲線，確定蔗糖為最佳碳源；選用M9作為基本培養(yǎng)基，碳源選用1

4、％的葡萄糖，氮源分別選用酵母粉、蛋白胨、NH4Cl、NaNO3，37℃，pH7.0條件下培養(yǎng)，繪制不同氮源的生長(zhǎng)曲線，確定酵母粉是最佳氮源。在土豆培養(yǎng)基上用濾紙片法測(cè)量BurkholderiaKDMD的菌液對(duì)4種真菌的抑制作用，發(fā)現(xiàn)對(duì)馬鈴薯干腐(Pythiumsolani)的抑制作用最大，其次為西瓜枯萎、煙草赤星和小麥赤霉。用CAS培養(yǎng)基測(cè)定出BurkholderiaKDMD產(chǎn)生少量鐵螯和蛋白，用苦味酸溶液測(cè)定出Burkholderia