青花菜莖葉生物活性及活性成分研究.pdf

1、青花菜莖葉是青花菜(Brassica oleracea var.italica)成熟花球采摘后的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品，往往占整個(gè)青花菜總量的60％-70％。我國(guó)每年都會(huì)產(chǎn)生大量的青花菜莖葉農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物，但大部分青花菜莖葉往往是直接廢棄掉，其利用程度極低。因此，本文就對(duì)其生物活性物質(zhì)和生物活性進(jìn)行研究，以期為更好的利用青花菜莖葉提供一定的方向和理論參考。
　　首先，本文選取了浙江省內(nèi)常見(jiàn)的四個(gè)品種（‘炎秀’、‘陽(yáng)光’、‘耐寒優(yōu)秀，、‘綠雄’）的

2、青花菜莖葉，對(duì)其總酚、總黃酮、粗多糖、維生素C、粗蛋白、粗脂肪、礦質(zhì)元素和抗氧化活性進(jìn)行了測(cè)定，多方面評(píng)價(jià)其營(yíng)養(yǎng)和保健功效。結(jié)果表明，不同品種莖葉的活性成分和抗氧化活性有一定的差異;其中‘耐寒優(yōu)秀’莖葉具有最高的粗多糖含量，‘炎秀’莖葉具有最高的總多酚含量，因此選取二者為后續(xù)研究對(duì)象。
　　以‘炎秀’莖葉為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)其70％乙醇提取物和其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇的萃取相的進(jìn)行了總多酚和總黃酮的測(cè)定，同時(shí)研究了這些組分的抗氧

3、化活性，包括對(duì)DPPH自由基、ABTS+自由基的清除和還原能力;以及對(duì)α-糖苷酶、酪氨酸酶的抑制活性。結(jié)果表明，以上組分都具有一定的抗氧化活性，其中乙酸乙酯相的抗氧化活性最強(qiáng)。另外，乙酸乙酯相也表現(xiàn)的較強(qiáng)的α-糖苷酶和酪氨酸酶抑制活性和最高的總酚、總黃酮含量。通過(guò)硅膠柱層析對(duì)乙酸乙酯相進(jìn)行分離純化，得到了一個(gè)化合物為膽固醇。對(duì)膽固醇進(jìn)行生物活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)其具有較好的α-糖苷酶抑制活性。
　　以‘耐寒優(yōu)秀’莖葉為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)Pla

4、ckett-Burman和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化提取青花菜莖葉多糖(PBB)。首先，通過(guò)Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，料液比、提取時(shí)間、提取溫度被確定為對(duì)多糖提取率有顯著影響的主要因素。其次，上述三因素、三水平的Box-Behnken因素設(shè)計(jì)和多元二次項(xiàng)模型來(lái)優(yōu)化提取青花菜莖葉多糖。最后，用優(yōu)化的提取條件來(lái)驗(yàn)證實(shí)際最大提取率。結(jié)果表明，提取溫度為82℃，提取時(shí)間為212min，料液比為26mL/g為獲得最大多糖提取率的最優(yōu)條件。在

5、最優(yōu)條件下，其理論最大提取率為16.64％，與實(shí)際最大提取率(16.59±0.04)％無(wú)顯著差異;因此，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)模型能較好的用于青花菜莖葉多糖的提取優(yōu)化。
　　上述青花菜莖葉多糖經(jīng)除蛋白和大孔樹(shù)脂脫色后(PBB-1)，用DEAE Fast Flow陰離子柱進(jìn)行分離純化，得到PBB-1a、PBB-1b、PBB-1c、PBB-1d四個(gè)多糖亞組分。由于PBB-1a和PBB-1c產(chǎn)量較高，則進(jìn)一步研究了其化學(xué)成分，包括糖、蛋白、糖醛酸、

6、硫酸基團(tuán)、總酚，同時(shí)對(duì)其紅外吸收光譜特征也進(jìn)行了表征。另外，也對(duì)其體外抗氧化和體外降血糖的生物活性進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，測(cè)試多糖組分均具有一定的抗氧化和降血糖活性，其中PBB-1c在這兩個(gè)活性指標(biāo)中均表現(xiàn)了最好的活性。對(duì)PBB-1c進(jìn)行Sephadex G-100凝膠柱層析得到了一個(gè)相對(duì)均一的多糖PBB-1c-1。對(duì)PBB-1c-1進(jìn)行MTT試驗(yàn)測(cè)試其對(duì)HepG2癌細(xì)胞的抑制效果，并用熒光顯微鏡觀察其對(duì)HepG2細(xì)胞的形態(tài)影響。結(jié)果提示