活動(dòng)性肺結(jié)核患者HMGB1與炎癥相關(guān)因子IL-6、IL-10及TNF-α檢測(cè)及相關(guān)性研究.pdf

1、高遷移率族蛋白1(HMGB1)主要由免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞）、成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞分泌。胞外HMGB1作為一種促炎因子，通過分子相關(guān)模式，招募與其相關(guān)的炎性細(xì)胞啟動(dòng)機(jī)體固有免疫，與多種肺部疾?。ㄈ缦OPD、急性呼吸窘迫綜合征、肺炎、肺損傷以及肺癌）的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。目前，有關(guān)HMGB1在結(jié)核分枝桿菌感染性疾病中的研究仍較少。本研究旨在檢測(cè)HMGB1及其相關(guān)炎癥因子IL-6、IL-10和TNF-α在肺結(jié)核患者血漿和

2、痰液中的含量，并分析HMGB1與炎性因子、固有免疫細(xì)胞等的關(guān)系，為結(jié)核病的預(yù)防、診斷及臨床治療提供理論依據(jù)。
　　[目的]
　　檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿和外周血中HMGB1、IL-10、IL-6及TNF-α的水平，并分析它們之間有何種關(guān)系，探討HMGB1、IL-10、IL-6及TNF-α與患者外周血中單核細(xì)胞的相關(guān)性;體外實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)BCG刺激PMA誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞后，HMGB1、IL-10、IL-6及TNF-α的表達(dá)，

3、進(jìn)一步證實(shí)HMGB1是否協(xié)同炎癥相關(guān)細(xì)胞因子參與調(diào)節(jié)活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血中單核細(xì)胞的免疫功能。
　　[方法]
　　1.按照2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)收集36例痰涂結(jié)核菌陽性活動(dòng)性肺結(jié)核患者及32例健康志愿者的外周血及痰液，采用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)并分析外周血白細(xì)胞的數(shù)量，采用ELISA方法檢測(cè)痰液及血漿中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量。
　　2.采用佛波酯(PMA)誘導(dǎo)TH

4、P-1分化為巨噬樣細(xì)胞后，分別采用BCG、LPS刺激，并于刺激后6h、12h及24h收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，采用ELISA法檢測(cè)HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量，同時(shí)設(shè)PBS對(duì)照組。加入抗HMGB1阻斷抗體后，采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)THP-1細(xì)胞HMGB1 mRNA和IL-6 mRNA的表達(dá)，進(jìn)一步探討B(tài)CG刺激THP-1細(xì)胞后HMGB1及IL-6表達(dá)水平的關(guān)系。
　　[結(jié)果]
　　1.肺結(jié)核患者外周血白細(xì)胞檢測(cè)

5、結(jié)果
　　全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)結(jié)果顯示肺結(jié)核患者外周血白細(xì)胞總數(shù)、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞絕對(duì)值均顯著高于健康志愿者，且單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著高于正常對(duì)照組，但中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)與正常人無顯著差異。
　　2.活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿和痰液中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量及相關(guān)性分析
　　活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿和痰液中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量較健康對(duì)照組均明顯升高;活動(dòng)性肺結(jié)

6、核患者血漿HMGB1、IL-6、IL-10含量分別與其痰液中的含量呈正相關(guān)，血漿TNF-α含量與在其痰液中的含量無明顯相關(guān);健康對(duì)照組痰液HMGB1、IL-6、IL-10以及TNF-α含量分別與其血漿中的含量均無相關(guān)性;對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿和痰液中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，無論是血漿還是痰液中，HMGB1與IL-6、IL-6與TNF-α含量之間均有顯著相關(guān)性，其余各炎癥因子之間無明顯相關(guān)性;活

7、動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿中HMGB1、IL-6含量與外周血單核細(xì)胞絕對(duì)數(shù)之間均呈正相關(guān)。
　　3.BCG刺激PMA誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞產(chǎn)生HMGB1及炎癥相關(guān)因子的檢測(cè)與分析
　　BCG刺激組HMGB1、IL-6含量明顯低于LPS刺激組，但明顯高于空白對(duì)照組;BCG或LPS刺激PMA誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞后，HMGB1、IL-6分泌均具有時(shí)間依賴性，其分泌量均在刺激的24 h達(dá)到最高點(diǎn);BCG刺激組IL-10含量明顯低于LPS刺激組

8、，但明顯高于空白對(duì)照組;BCG或LPS刺激PMA誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞12h時(shí)，IL-10的分泌量達(dá)到最高，之后逐漸下降;BCG刺激組上清液中TNF-α含量與LPS刺激組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但兩組均高于空白對(duì)照組，BCG或LPS刺激細(xì)胞TNF-α的分泌也具有時(shí)間依賴性，其分泌量均在刺激的24 h達(dá)到最高點(diǎn)。
　　4.抗HMGB1阻斷抗體對(duì)BCG刺激PMA誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞產(chǎn)HMGB1及IL-6表達(dá)的影響
　　抗HMGB1阻