BMI-1基因和蛋白在宮頸癌中的表達(dá)和臨床意義.pdf

1、目的:宮頸癌是世界范圍內(nèi)最常見的婦科惡性腫瘤，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展包括一系列復(fù)雜過程。BMI-1屬于多疏基因(PcG)家族，研究證實BMI-1基因與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，基于其在癌癥患者體內(nèi)的廣泛表達(dá)和在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生中的關(guān)鍵作用，提示其有望成為一種用于腫瘤診斷、預(yù)后判斷的新指標(biāo)和腫瘤免疫治療的靶基因。而BMI-1基因在婦科腫瘤中研究還比較少，目前國內(nèi)還沒有與宮頸癌的相關(guān)研究。
　　 本實驗通過實時定量PCR，免疫組化的方法檢

2、測BMI-1基因在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與病理參數(shù)的關(guān)系，初步評價BMI-1基因在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其意義。
　　 材料與方法:
　　 一、實驗材料
　　 （一）材料
　　 病理石蠟標(biāo)本，新鮮宮頸癌組織標(biāo)本均取自同一患者。選取中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科2008年到2009年手術(shù)切除和宮頸活檢的浸潤性宮頸癌標(biāo)本30例（其中高分化18例，中低分化12例，中低分化中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者3例，其余未見轉(zhuǎn)移

3、，鱗癌25例，腺癌5例）。因子宮肌瘤行子宮切除的正常宮頸標(biāo)本10例，所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)診斷，宮頸癌患者術(shù)前均未進行過放療、化療。將所獲得的新鮮富頸組織放入液氮中，-80℃保存?zhèn)溆谩?br>　　 （二）試劑
　　 鼠抗人BMI-1單克隆抗體購自美國abm公司．SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑購自北京中杉公司。實時定量PCR實驗中Trizol試劑，反轉(zhuǎn)錄及SYBR Premix ExTaq試劑盒，GAPDH，引物均購自TAKARA

4、公司。
　　 二、實驗方法
　　 （一）實時定量PCR組織采用Trizol法提取細(xì)胞總RNA。反轉(zhuǎn)錄與實時定量PCR擴增均嚴(yán)格按照試劑盒說明進行，并以GAPDH基因為內(nèi)參基因。BMI-1基因引物序列如下：BMI-1上游引物：5’-CAACTGGTTCGACCTTTGCAGATA-3’;下游引物：5’-GATGTGCCAATTGCTTCTAATGGA-3’目標(biāo)組△Ct值=目標(biāo)基因Ct值一內(nèi)參基因Ct值對照組△Ct值=目標(biāo)基

5、因Ct值一內(nèi)參基因Ct值[2-△△Ct=2-(△Ct(目標(biāo)組)一（△Ct(對照組)）]。
　　 （二）免疫組化方法
　　 每個蠟塊取4μm厚連續(xù)切片做免疫組化染色，鼠抗入BMI-1單克隆抗體濃度稀釋為50ug/ml，按SP試劑盒實驗步驟進行操作，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。并用PBS代替一抗作為陰性對照，BMI-1蛋白是一種核蛋白，組化染色結(jié)果顯示為細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒（染色陽性），測其平均光密度值進行分析。

6、
　　 三、統(tǒng)計學(xué)分析
　　 所得數(shù)據(jù)在SPSS16.0統(tǒng)計軟件包中行t檢驗完成，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：宮頸癌組織中BMI-1mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著高于正常富頸組織中的表達(dá)，有統(tǒng)計學(xué)意義；且中低分化和（或）伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的宮頸癌組織中BMI-1蛋白的表達(dá)高于正常宮頸組織的表達(dá)，有統(tǒng)計學(xué)意義；BMI-1蛋白在富頸鱗癌與腺癌的相對表達(dá)量比較無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：BMI-1基因和