杜仲葉提取物及其單體槲皮素、（+）-丁香脂素抑制BMSCs成脂分化研究.pdf

1、目的：
　　研究杜仲葉提取物抑制 BMSCs成脂分化作用及其有效物質(zhì)的篩選。
　　方法：
　　取 SD大鼠(一個月齡左右)1只,通過全骨髓貼壁法分離 SD大鼠 BMSCs;用流式細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行 BMSCs鑒定;分別用苔盼藍(lán)計數(shù)法及 MTT法對細(xì)胞生長曲線進(jìn)行測定;配制脂肪細(xì)胞分化誘導(dǎo)液,初步對杜仲葉提取物及其單體化合物進(jìn)行研究,實驗分4組:藥物(1μg/ml)+陽性組、藥物(0.01μg/ml)+陽性組、陽性組、陰性組

2、;對有效物質(zhì)進(jìn)行下一步實驗,實驗分5組:藥物(1μg/ml)+陽性組、藥物(0.1μg/ml)+陽性組、藥物(0.01μg/ml)+陽性組、陽性組、陰性組;干預(yù)14天后終止培養(yǎng),觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,并用油紅 O染色法進(jìn)行細(xì)胞染色、并計數(shù);用熒光定量 PCR法分別檢測脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因 PPARγ2及 C/EBPα表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示 CD29、CD90陽性率分別為93.86％、92.16%

3、, CD34、CD45陽性率分別為6.99%、5.31%;苔盼藍(lán)法對第3、4、5代 BMSCs進(jìn)行計數(shù),發(fā)現(xiàn)不同代數(shù)細(xì)胞生長趨勢相仿,繼續(xù)用 MTT法檢驗第3代細(xì)胞生長情況,結(jié)果與苔盼藍(lán)計數(shù)一致;油紅 O染色及計數(shù)成脂率結(jié)果示,與陽性組比較,杜仲葉提取物、槲皮素、(+)-丁香脂素各干預(yù)組脂肪細(xì)胞分化率均減少(p<0.05),且具有藥物濃度依賴性;熒光定量 PCR法檢測基因結(jié)果顯示:與陽性組相比,杜仲葉提取物、槲皮素、(+)-丁香脂素各藥