葡萄皮提取物調(diào)節(jié)GRP78表達(dá)抑制脂褐素累積RPE細(xì)胞凋亡.pdf

1、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞處于光感受器外節(jié)和脈絡(luò)膜內(nèi)皮細(xì)胞之間。最為突出的功能是吞噬和消化老化脫落的外節(jié)膜盤，隨著年齡的增長RPE細(xì)胞內(nèi)的脂褐素會逐漸積累，這也成為其衰老的標(biāo)志之一。在可見光或紫外線誘導(dǎo)下積累的脂褐素產(chǎn)生活性氧并引起 RPE細(xì)胞氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及未折疊蛋白反應(yīng)等，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，引發(fā)年齡相關(guān)性眼病。GRP78是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白分子伴侶，有輔助蛋白質(zhì)正確折疊的功能，同時參與到細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑中。
　　本文的研究對象為紅

2、葡萄皮提取物。通過化學(xué)合成脂褐素主要熒光物質(zhì) A2E（N-亞視黃基-N-視黃基乙醇胺），建立 RPE細(xì)胞累積脂褐素模型。檢測藍(lán)光誘導(dǎo)A2E累積RPE細(xì)胞凋亡，進(jìn)而研究GSEs對凋亡的抑制作用。在此基礎(chǔ)上，研究了GSEs對A2E累積RPE細(xì)胞中GRP78及其下游凋亡信號分子CHOP表達(dá)的影響。此外，初步探討了GSEs對A2E累積RPE細(xì)胞中活性氧（ROS）的抑制作用。為GSEs作為一種膳食補充劑降低年齡相關(guān)性眼病風(fēng)險提供了實驗依據(jù)。本課題

3、的主要研究結(jié)果如下：
　?。?）通過化學(xué)方法合成并純化獲得實驗所需A2E，建立RPE細(xì)胞脂褐素積累模型。當(dāng)A2E處理濃度為25μM時，A2E積累量為141±7 ng/10^5個細(xì)胞與老年人眼組織RPE細(xì)胞中含量相近。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)A2E分散在細(xì)胞核周圍，與人眼組織中RPE細(xì)胞生理狀態(tài)一致。
　?。?）MTT法檢測細(xì)胞活力。低濃度A2E對RPE細(xì)胞活力沒有影響，25μM A2E處理RPE細(xì)胞經(jīng)藍(lán)光照射后培養(yǎng)12h抑制

4、率到達(dá)17.87±2.91％。GSEs能抑制藍(lán)光誘導(dǎo)A2E累積RPE細(xì)胞活性下降。
　　（3）流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。25μM A2E處理RPE細(xì)胞后出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，且呈現(xiàn)出時間效應(yīng)。GSEs能抑制藍(lán)光誘導(dǎo) A2E累積RPE細(xì)胞凋亡，濃度為5μg/mL時抑制作用最為顯著。
　　（4）機(jī)理研究。實驗結(jié)果表明，GSEs通過上調(diào)GRP78表達(dá)抑制藍(lán)光誘導(dǎo)A2E累積RPE細(xì)胞凋亡。同時，GSEs能抑制GRP78下游凋亡信號分子CHOP