點陣Er-YAG激光輔助干擾素遞送治療增生性瘢痕的實驗研究.pdf

1、目的:
　　1.驗證點陣Er:YAG激光輔助干擾素遞送對兔耳增生性瘢痕治療的有效性;
　　2.觀察治療后瘢痕內(nèi)成纖維細胞凋亡情況,檢測瘢痕組織細胞因子VEGF、MMP-1、TGF-β1及I型膠原的變化,以探討點陣激光輔助干擾素遞送治療增生性瘢痕可能的作用機制,為臨床治療的有效性提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.健康成年新西蘭大耳白兔40只制作兔耳增生性瘢痕動物模型。兔雙耳腹側(cè)皮膚局麻下每側(cè)作6個直徑為9mm的圓

2、形創(chuàng)面,完整去除皮膚全層及軟骨膜,保留軟骨。
　　2.按隨機化方法將瘢痕分為三組,治療組行點陣Er:YAG激光治療后即刻給予干擾素α-2b凝膠涂抹,并應用電離子導滲儀導入10分鐘,隨后再次涂抹凝膠并封包24小時;對照組給予點陣Er:YAG激光治療;空白組不予治療。
　　3.治療后1、3、7、14、30天分別測量各組瘢痕厚度計算瘢痕增生指數(shù)并切取瘢痕。HE染色觀察瘢痕組織病理變化。TUNEL檢測瘢痕組織內(nèi)細胞凋亡情況。免疫組化

3、方法檢測瘢痕組織中VEGF和MMP-1的表達變化。Real-time PCR技術(shù)檢測VEGF、MMP-1、TGF-β1及Ⅰ型膠原mRNA的表達。
　　結(jié)果:
　　1.大體觀察:術(shù)后28天形成質(zhì)硬、紅色的增生性瘢痕。治療組與對照組治療后即刻可見瘢痕表面MTZ區(qū)點狀出血,治療組給予干擾素涂抹并導入后及治療后1天、3天瘢痕顏色較對照組變暗;治療組與對照組均于治療后7天開始瘢痕顏色變淺。治療后14天、30天治療組、對照組瘢痕增生指數(shù)

4、下降,治療組比對照組下降更明顯,瘢痕變軟、變平。治療后30天治療組瘢痕完全消退,對照組瘢痕基本變平;空白組治療后30天瘢痕顏色、質(zhì)地及高度均未見明顯變化。
　　2.HE染色組織學觀察:
　　治療后即刻及治療后1天,治療組較對照組紅細胞外滲范圍更廣,可達MTZ較遠組織;治療后治療組與對照組血管數(shù)量逐漸減少,治療后1天、3天及7天治療組較對照組血管數(shù)量減少更明顯;治療后治療組與對照組成纖維細胞逐漸減少,膠原逐漸趨于平行排列。

5、r>　　3.TUNEL檢測成纖維細胞凋亡:在角朊細胞、成纖維細胞及血管內(nèi)皮細胞中可見凋亡細胞。治療組與對照組治療后成纖維細胞凋亡率逐漸增高,治療后7天達高峰,與空白組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療后1天、3天治療組比對照組凋亡率更高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療后30天空白組可見大量凋亡細胞。
　　4.VEGF蛋白及mRNA表達:免疫組化結(jié)果顯示治療組、對照組于治療后7天開始VEGF陽性率逐漸降低,治療后7天

6、、14天、30天兩組表達率明顯低于空白組,且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療后7天、14天治療組比對照組VEGF表達率低,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示治療后7天開始VEGF mRNA表達量逐漸下降,治療后7天、14天、30天,治療組、對照組均比空白組表達量低,治療組比對照組表達量低,且差異有統(tǒng)計學意義。
　　5.MMP-1蛋白及mRNA表達:免疫組化結(jié)果顯示治療組與對照組治療后表達

7、逐漸升高,7天達高峰,治療組與對照組表達量高于空白組,差異有統(tǒng)計學意義,治療組高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義。Real-time PCR結(jié)果顯示治療組與對照組治療后MMP-1mRNA表達量逐漸升高,治療后7天達峰值,空白組表達量未見明顯變化。治療后治療組高于對照組和空白組,對照組高于空白組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　6.TGF-β1mRNA的表達:Real-time PCR結(jié)果顯示治療后治療組與對照組表達量逐漸下降

8、,治療組較對照組和空白組降低,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療后3天、7天、14天、30天對照組較空白組降低,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)?？瞻捉M治療前后變化不明顯。
　　7.I型膠原mRNA的表達:Real-time PCR結(jié)果顯示治療前各組I型膠原mRNA相對表達量最高,治療后治療組與對照組I型膠原mRNA相對表達量逐漸下降,與空白組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療后3天、7天、14天、30天治療組比對

9、照組下降明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)?？瞻捉M治療前后變化不明顯。
　　結(jié)論:
　　1.點陣Er:YAG激光輔助干擾素遞送比單獨應用點陣Er:YAG激光治療效果更明顯,可以迅速促進瘢痕的軟化、消退。
　　2.點陣Er:YAG激光可以促進成纖維細胞的凋亡,激光輔助干擾素透皮吸收后,成纖維細胞的凋亡率明顯增高。
　　3.點陣Er:YAG激光能降低兔耳增生性瘢痕組織中VEGF的分泌和表達,激光輔助干擾素透皮吸收