2940nm點陣鉺激光對兔耳增生性瘢痕中VEGF的影響.pdf

1、研究背景：
　　 眾所周知，增生性瘢痕是一直困擾醫(yī)生和患者的問題，尤其是讓整形外科醫(yī)生和皮膚外科醫(yī)生面臨著重大挑戰(zhàn)。增生性瘢痕(HS)主要是由纖維細胞過度增殖和膠原過量堆積以及慢性炎癥導(dǎo)致的毛細血管過度生長所致。手術(shù)、燒傷、意外傷等創(chuàng)傷后都可能形成HS，感染、異物等也是其形成的誘發(fā)因素，全球每年有數(shù)百萬人飽受其害。在治療方面，大部分研究傾向于如何用藥物預(yù)防HS的形成，這并不能反映其治療作用。
　　 對瘢痕的治療始于183

2、5年，主要是用壓力療法，逐漸發(fā)展到硅酮凝膠膜、局部皮質(zhì)類固醇激素注射、維甲酸、外科切除移植、冷凍、放射、5-FU、IFN等治療手段以及多種方法聯(lián)合治療，聯(lián)合治療的效果要優(yōu)于單用一種治療方法的效果，但其中仍然存在疼痛、皮膚萎縮、色素改變、復(fù)發(fā)率高等副作用。為了讓患者達到更滿意的治療效果，國內(nèi)外學(xué)者學(xué)者在25年前尋找到了新的治療方法:激光。CO2激光被最早應(yīng)用于治療增生性瘢痕，但復(fù)發(fā)率高于90％，且有紅斑、滲出、不適等副作用，所以現(xiàn)在臨床上

3、已基本被其他方法所替代。國外也有個別應(yīng)用強脈沖激光(IPL)治療增生性瘢痕的報道，其治療的有效性未得到證實。脈沖染料激光(PDL)，被認(rèn)為是最有效的激光治療方法，但個別報道在隨機對照研究中，有紅斑等副作用產(chǎn)生，且有效性只在中低等（低0-33％改善，中34-66％改善），但是其治療效果可能與激光波長有關(guān)。2940nm點陣鉺激光治療增生性瘢痕見有一篇報道，但其治療機制不明。
　　 經(jīng)過許多研究者不斷的探索與實踐，認(rèn)為激光聯(lián)合其他治療

4、方法可能是最佳的選擇，但是增生性瘢痕的形成機制復(fù)雜，激光對其治療作用的具體機制也尚不明確。研究認(rèn)為激光治療增生性瘢痕的主要原理是利用激光的燒灼、汽化、切割、凝固及散焦等技術(shù)祛除瘢痕組織或損傷瘢痕內(nèi)血管、抑制膠原合成、抑制成纖維細胞的增殖及誘導(dǎo)細胞凋亡。點陣激光作用于瘢痕時產(chǎn)生矩陣狀排列的微熱損傷，會刺激皮膚重新均勻地啟動修復(fù)程序，最終使包括表皮和真皮在內(nèi)的全層皮膚發(fā)生重塑和重建，達到治療目的[8]。為了更好的了解增生性瘢痕的形成機制及找

5、到更好的治療方法，研究者進行了許多基礎(chǔ)性研究，由于基礎(chǔ)性研究需要大量的標(biāo)本，所以現(xiàn)在一般采取制作動物模型的方法進行研究。目前，人們主要建立了3種動物模型:裸鼠模型、兔耳模型和雌性杜洛克豬模型。由于裸鼠模型是將人的HS組織移植到裸鼠身上，其缺點就有不是自身產(chǎn)生的HS、不能動態(tài)觀察HS的形成，為了克服這些缺點，研究者利用大白兔，在其耳朵腹側(cè)面造成缺損創(chuàng)面，并使其自然愈合形成增生性瘢痕，從組織學(xué)等方面觀察，兔耳創(chuàng)面可以產(chǎn)生與人HS類似的增生塊

6、，因此這種方法被廣泛應(yīng)用于增生性瘢痕的基礎(chǔ)性研究。基于此，本實驗旨在應(yīng)用兔耳增生性瘢痕模型對2940nm點陣鉺激光在增生性瘢痕中的影響進行研究，進一步探討其作用機制。
　　 研究目的：
　　 1、觀察2940nm點陣鉺激光是否對兔耳增生性瘢痕有治療作用。
　　 2、進一步研究2940nm點陣鉺激光對增生性瘢痕內(nèi)VEGF的影響，探討其可能的作用機制。
　　 研究方法：
　　 1.兔耳增生性瘢痕模型的

7、建立及分組:取37只新西蘭大耳白兔，實驗前用剃胡刀將兔耳腹側(cè)面毛發(fā)去除，以2 ml(:)0.1 g鹽酸氯胺酮注射液(30 mg/kg)耳緣靜脈麻醉后，兔耳腹側(cè)面皮膚乙醇消毒。避開可見血管，用9mm環(huán)鉆鉆出5個圓形皮損，皮損區(qū)內(nèi)皮膚連同其下軟骨膜一起去除，保留軟骨。術(shù)后用紅霉素眼膏涂于皮損處預(yù)防感染并觀察傷口愈合情況及瘢痕形成時間，待兔耳瘢痕模型形成后，共有370個瘢痕，每只兔耳5個瘢痕面隨機給予不同處理方式:選19只兔子的170個瘢痕作

8、為陰性對照組（瘢痕面未做治療且瘢痕自然生長），另18只兔子的160個瘢痕作為激光治療組(2940nm點陣鉺激光治療，治療參數(shù):密度3-5％，剝脫深度300-800μ m)。
　　 2.形態(tài)學(xué)觀察:取24只新西蘭白兔，激光治療組和對照組各12只。在給予瘢痕面不同處理方式之后的第7、14、30天大體觀察兔耳瘢痕增生情況，同時用游標(biāo)卡尺，測量治療前、治療后第7、14、30天4個時間點瘢痕的厚度及瘢痕周圍正常皮膚的厚度，以瘢痕的厚度/正

9、常皮膚的厚度表示瘢痕的增生指數(shù)(SEI)，其測量方法見圖一。按以上方法測出每個時間點的SEI，并算出每個時間點瘢痕增生指數(shù)的均數(shù)，以(x)±s表示，結(jié)果做配對t檢驗。
　　 3.組織學(xué)觀察:激光組在給予瘢痕面激光治療后第7、14、30天各取12個瘢痕組織塊，對照組在以上相同時間點及瘢痕自然生長后70天各取12個瘢痕組織塊，標(biāo)本經(jīng)10％甲醛溶液固定24 h后乙醇脫水、石蠟包埋、切片，HE染色觀察，采用leika圖像分析儀，在光鏡1

10、0×40倍視野下，測出瘢痕內(nèi)血管面密度（血管總面積/視野內(nèi)瘢痕總面積）和數(shù)密度（血管數(shù)量/視野內(nèi)瘢痕總面積）;采用SP免疫組化法檢測標(biāo)本中VEGF的表達。陰性對照以PH7.4的PBS代替第一抗體作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.肉眼觀察，激光組在治療后比治療前瘢痕厚度明顯變薄。激光治療組治療后第7、14、30天，瘢痕增生指數(shù)逐漸減小，與對照組相比明顯下降。
　　 2.HE染色觀察，瘢痕組織內(nèi)血管由粗大變細小

11、，膠原纖維由排列不齊變排列整齊。
　　 3.免疫組化染色觀察，激光治療組VEGF水平逐漸降低。
　　 結(jié)論：
　　 1、在動物實驗中，2940nm點陣鉺激光對增生性瘢痕具有一定有效性，為臨床治療增生性瘢痕提供新思路和依據(jù)。
　　 2、本研究2940nm點陣鉺激光作用于兔耳腹側(cè)增生性瘢痕后，通過對瘢痕大體觀察、HE染色觀察及免疫組化觀察瘢痕內(nèi)VEGF的表達，2940nm點陣鉺激光作用兔耳增生性瘢痕可破壞瘢痕