中藥海桐皮抗腫瘤活性成分及G-四鏈體配體研究.pdf

1、海桐皮(五加科植物刺楸莖皮)為我國傳統(tǒng)中藥，具有涼血散瘀、祛風(fēng)除濕等功效;廣泛用于治療跌打損傷、神經(jīng)痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病?，F(xiàn)代研究顯示海桐皮含有常春藤皂苷元、單寧、黃酮、香豆素、酚酸等多種化學(xué)成分;還具有抗炎、抗糖尿病、抗真菌、抗腫瘤等生物活性。但是，對于海桐皮藥材本身抗腫瘤活性物質(zhì)的研究報道還比較少。
　　本論文以體外抑制人肺癌A-549細(xì)胞增殖試驗和穩(wěn)定G-四鏈體CD變溫試驗為指導(dǎo)，基于高效液相色譜法快速篩選G-四鏈體配體的

2、方法，充分利用離心分配色譜和高速逆流色譜的高效分離優(yōu)勢，對海桐皮所含成分進行了抗腫瘤活性的研究。
　　1、海桐皮樣品預(yù)處理及活性評價。采用75％乙醇浸提海桐皮，在MTT比色法測定海桐皮乙醇提物具有抗腫瘤活性，CD變溫試驗確定其可以穩(wěn)定G-四鏈體的基礎(chǔ)上，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇對乙醇提取物進行分級萃取以達到分級分離;然后對各級產(chǎn)物進行MTT細(xì)胞試驗和CD變溫試驗，實驗結(jié)果表明:海桐皮乙醇提取物各級產(chǎn)物對人肺癌A-549細(xì)胞增殖具

3、有不同程度的抑制作用，其中石油醚萃取物相對明顯;海桐皮乙醇提取物乙酸乙酯萃取物對G-四鏈體具有較明顯的穩(wěn)定性作用。
　　2、建立海桐皮乙醇提取物石油醚萃取物液相分析方法，采用離心分配色譜分離得到一單體化合物，經(jīng)MS、1H-NMR、13C_NMR鑒定為魯望桔內(nèi)酯，經(jīng)MTT比色法測定其對人肺癌A-549細(xì)胞增殖具有較強的抑制作用，其IC50為4.28μg/mL。此為首次在海桐皮中分離得到魯望桔內(nèi)酯，也是首次對其抗腫瘤活性進行研究。

4、r>　　3、建立高效液相色譜法直接從海桐皮乙醇提取物乙酸乙酯萃取物中篩選G-四鏈體配體的方法，并結(jié)合高速逆流色譜法對可能與G-四鏈體相互作用的潛在配體進行分離純化，經(jīng)MS、1H-NMR、13C-NMR確定四種潛在配體分別為2，4-二羥基苯甲酸、綠原酸、咖啡酸、5-阿魏?？鼘幩帷＝?jīng)CD變溫實驗確定其中三種化合物:2，4-二羥基苯甲酸、綠原酸、咖啡酸均為G-四鏈體配體，其分別可將G-四鏈體配體的熔點提高7℃、10℃和3℃。所建立的方法具有簡