金屬鉑(Ⅱ)配合物與g-四鏈體DNAs的相互作用及生物活性研究.pdf

1、金屬配合物鍵合和穩(wěn)定G-四鏈體DNA的性質(zhì)，在癌癥治療中有重要意義，因?yàn)樗梢酝ㄟ^這種方式來調(diào)控原癌基因的轉(zhuǎn)錄水平、抑制端粒酶活性和癌細(xì)胞的增殖。本論文合成了三個(gè)新型的基于鄰菲羅啉苯并咪唑衍生物的金屬鉑(Ⅱ)配合物，并詳細(xì)研究了它們與G-四鏈體DNAs(人端粒HTG、原癌基因啟動(dòng)子c-Myc和c-Kit2)的相互作用、端粒酶活性抑制以及抗腫瘤作用。
　　1.通過FRET melting實(shí)驗(yàn)和PCR Stop實(shí)驗(yàn)表明，三個(gè)配合物能夠

2、穩(wěn)定G-四鏈體DNA的結(jié)構(gòu)。在含100 mM KCl的磷酸緩沖體系中，當(dāng)配合物A、B和C濃度為1μM時(shí)，人端粒F21T的熔點(diǎn)溫度增加值（△Tm）分別為25.4℃、27.1℃和29.2℃，啟動(dòng)子Fc-MycT的△Tm值分別為14.8℃、15.5℃和16.6℃，盡管啟動(dòng)子Fc-Kit2T的△Tm值分別為7.6℃、10.7℃和12.5℃。通過體外端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)得出，三個(gè)配合物可以通過穩(wěn)定端粒末端G-四鏈體DNA的結(jié)構(gòu)，間接抑制端粒酶的活性

3、。
　　2.競(jìng)爭(zhēng)的FRET melting實(shí)驗(yàn)表明，含100mM KCl的磷酸緩沖體系中，在10倍過量雙螺旋DNA存在下，G-四鏈體DNA的△Tm值幾乎不變，然而在25倍過量雙螺旋DNA存在下，△Tm值均有不同程度的減小，說明在10倍過量雙螺旋DNA存在下，三個(gè)配合物能選擇性識(shí)別并穩(wěn)定G-四鏈體DNA結(jié)構(gòu)。
　　3.紫外吸收滴定實(shí)驗(yàn)和熒光滴定實(shí)驗(yàn)表明，配合物A、B和C可能堆積在G-四鏈體DNA的末端，與G-四聚體平面發(fā)生了π

4、-π相互作用，結(jié)合常數(shù)約為106-107M-1。CD譜實(shí)驗(yàn)表明，配合物與G-四鏈體DNA作用后，CD譜上相應(yīng)的特征峰變化較小，說明作用后對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)只是稍有擾動(dòng)。
　　4.通過MTT比色法證實(shí)了配合物A、B和C都能夠一定程度上抑制HeLa細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的增殖，其中配合物A的效果最強(qiáng)，相應(yīng)的IC50值分別為15μM和42μM。通過細(xì)胞周期分析實(shí)驗(yàn)得出，配合物與HeLa細(xì)胞和HepG2細(xì)胞作用24h后，G0/G1的細(xì)胞比例增加，