不同時期下頜骨骨痂組織中TGF-β1BMP-2表達的實驗研究.pdf

1、目的：通過對不同時期人體下頜骨骨折骨痂標本進行蘇木素-伊紅(Haematoxylin-eosin，HE)染色的組織學觀察及對骨痂組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growthfactorβ1，TGF-β1)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein2，BMP-2)的免疫組化表達進行半定量檢測，了解頜骨骨折愈合的組織病理學變化；探討轉(zhuǎn)化生長因子β1、骨形成蛋白-2在人頜骨骨折愈合的不同階段中免疫

2、組化表達及意義。
　　 方法：選擇行下頜骨骨折手術的患者30例，術前經(jīng)計算機斷層掃描(ComputedTomography，CT)圖像或曲面體層片確定骨折的部位，其中牙槽骨2例、頦部15例、下頜體部7例、下頜角部6例。術中收集骨痂標本，根據(jù)骨折的不同時期分為骨折后第一周、第二周、第三周、第四周，共四組，其中骨折后第一周共10例、第二周12例、第三周5例、第四周3例，收集的骨痂標本經(jīng)10％EDTA脫鈣后制成的石蠟切片，分別進行HE

3、染色，觀察骨折斷端的組織學變化。骨痂組織的石蠟標本行兔抗TGF-β、BMP-2為一抗的免疫組化染色，分別用光學顯微鏡觀察TGF-β1、BMP-2在骨痂組織中的表達部位及強度，并在染色的切片照相后，用Image-Pro-Plus6.0圖像分析系統(tǒng)對染色陽性物質(zhì)進行平均光密度測定，以平均光密度(Mean opticaldensity，MOD)值表示相對含量，統(tǒng)計學處理采用SPSS16.0數(shù)據(jù)包進行單因素方差分析，結果以X±S表示。2例行方頜

4、畸形行手術切除的正常下頜角骨塊為正常對照。
　　 結果：
　　 1.HE染色組織學觀察：
　　 骨折后早期骨折局部血腫豐富，出現(xiàn)炎癥反應；隨著血腫的機化，骨折區(qū)域新生大量肉芽組織，其中毛細血管及成纖維細胞明顯增多；骨折后第二周，骨痂逐漸形成，骨痂組織所含的纖維及血管成分較多，此期的骨痂主要由新生的膠原纖維和活化的成纖維細胞組成，在骨膜及骨折斷面可見大量成骨細胞增殖分化；至骨折后第三周骨痂組織內(nèi)可見增殖的成軟骨細胞

5、和成骨細胞，及部分新生的骨團塊；骨折后第四周，成骨細胞形成的骨質(zhì)量增多，呈團塊樣排列。骨折后前四周在顯微鏡下大致可見其自然愈合過程包括血腫形成期、血腫機化期、骨痂形成期、骨痂成熟期，符合骨折愈合的
　　 2.免疫組化染色：
　　 TGF-β、BMP-2在骨折后的骨痂組織中均有表達。TGF-β1自骨折后第一周起逐漸表達，其MOD值為0.1603±0.0037，骨折后第二周陽性表達增強，MOD值為0.2639±0.0032，

6、至骨折后第三周達到最強，MOD值為0.2891±0.0035；然后逐漸減弱，骨折后第四周的MOD值為0.1867±0.0033。BMP-2：在骨折后第一周內(nèi)，在骨痂組織中即呈強陽性表達，MOD值為0.1725±0.0033；骨折后第二周達到最高峰，MOD值是0.2073±0.0041；從骨折第三周開始減弱，MOD值是0.1787±0.0039；至骨折后第四周MOD值為0.1505±0.0032。正常的下頜角骨塊組織中TGF-β1、及BM

7、P-2均呈陰性表達。骨折后不同時期的骨痂組織中TGF-β1、BMP-2免疫組化的MOD值均存在差異(P<0.05)，具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：1.本實驗選用的人下頜骨骨痂標本，經(jīng)過組織學觀察，其自然愈合的組織學變化符合下頜骨骨折正常的愈合規(guī)律。
　　 2.在正常的骨組織細胞中TGF-β1、BMP-2均呈陰性表達。在不同時期的骨痂標本中，骨折后第一周的骨痂組織中BMP-2呈強陽性表達，而TGF-β1逐漸呈弱陽性表達；骨

8、折后第二周開始TGF-β1在組織中的表達逐漸增強，而BMP-2的表達達到頂峰后逐漸減弱；骨折后第四周二者在骨痂組織中的表達均進一步減弱。實驗結果符合一般動物實驗的觀察。提示在骨折或骨缺損區(qū)域某些具有成骨潛能的未分化間充質(zhì)細胞可能首先合成并分泌BMP-2，這些細胞經(jīng)BMP-2誘導后生成大量新生骨組織，其中一些成骨細胞或軟骨細胞又可合成TGF-β1，并促進其分裂增殖，同時TGF-β1也可對局部成骨起促進作用。由此可知，在骨折修復時局部生長因