不同時(shí)期下頜骨骨痂組織中TGF-β1BMP-2表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)不同時(shí)期人體下頜骨骨折骨痂標(biāo)本進(jìn)行蘇木素-伊紅(Haematoxylin-eosin，HE)染色的組織學(xué)觀察及對(duì)骨痂組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growthfactorβ1，TGF-β1)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein2，BMP-2)的免疫組化表達(dá)進(jìn)行半定量檢測(cè)，了解頜骨骨折愈合的組織病理學(xué)變化；探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、骨形成蛋白-2在人頜骨骨折愈合的不同階段中免疫

2、組化表達(dá)及意義。
　　 方法：選擇行下頜骨骨折手術(shù)的患者30例，術(shù)前經(jīng)計(jì)算機(jī)斷層掃描(ComputedTomography，CT)圖像或曲面體層片確定骨折的部位，其中牙槽骨2例、頦部15例、下頜體部7例、下頜角部6例。術(shù)中收集骨痂標(biāo)本，根據(jù)骨折的不同時(shí)期分為骨折后第一周、第二周、第三周、第四周，共四組，其中骨折后第一周共10例、第二周12例、第三周5例、第四周3例，收集的骨痂標(biāo)本經(jīng)10％EDTA脫鈣后制成的石蠟切片，分別進(jìn)行HE

3、染色，觀察骨折斷端的組織學(xué)變化。骨痂組織的石蠟標(biāo)本行兔抗TGF-β、BMP-2為一抗的免疫組化染色，分別用光學(xué)顯微鏡觀察TGF-β1、BMP-2在骨痂組織中的表達(dá)部位及強(qiáng)度，并在染色的切片照相后，用Image-Pro-Plus6.0圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色陽(yáng)性物質(zhì)進(jìn)行平均光密度測(cè)定，以平均光密度(Mean opticaldensity，MOD)值表示相對(duì)含量，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0數(shù)據(jù)包進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以X±S表示。2例行方頜

4、畸形行手術(shù)切除的正常下頜角骨塊為正常對(duì)照。
　　 結(jié)果：
　　 1.HE染色組織學(xué)觀察：
　　 骨折后早期骨折局部血腫豐富，出現(xiàn)炎癥反應(yīng)；隨著血腫的機(jī)化，骨折區(qū)域新生大量肉芽組織，其中毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞明顯增多；骨折后第二周，骨痂逐漸形成，骨痂組織所含的纖維及血管成分較多，此期的骨痂主要由新生的膠原纖維和活化的成纖維細(xì)胞組成，在骨膜及骨折斷面可見(jiàn)大量成骨細(xì)胞增殖分化；至骨折后第三周骨痂組織內(nèi)可見(jiàn)增殖的成軟骨細(xì)胞

5、和成骨細(xì)胞，及部分新生的骨團(tuán)塊；骨折后第四周，成骨細(xì)胞形成的骨質(zhì)量增多，呈團(tuán)塊樣排列。骨折后前四周在顯微鏡下大致可見(jiàn)其自然愈合過(guò)程包括血腫形成期、血腫機(jī)化期、骨痂形成期、骨痂成熟期，符合骨折愈合的
　　 2.免疫組化染色：
　　 TGF-β、BMP-2在骨折后的骨痂組織中均有表達(dá)。TGF-β1自骨折后第一周起逐漸表達(dá)，其MOD值為0.1603±0.0037，骨折后第二周陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，MOD值為0.2639±0.0032，

6、至骨折后第三周達(dá)到最強(qiáng)，MOD值為0.2891±0.0035；然后逐漸減弱，骨折后第四周的MOD值為0.1867±0.0033。BMP-2：在骨折后第一周內(nèi)，在骨痂組織中即呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，MOD值為0.1725±0.0033；骨折后第二周達(dá)到最高峰，MOD值是0.2073±0.0041；從骨折第三周開(kāi)始減弱，MOD值是0.1787±0.0039；至骨折后第四周MOD值為0.1505±0.0032。正常的下頜角骨塊組織中TGF-β1、及BM

7、P-2均呈陰性表達(dá)。骨折后不同時(shí)期的骨痂組織中TGF-β1、BMP-2免疫組化的MOD值均存在差異(P<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)選用的人下頜骨骨痂標(biāo)本，經(jīng)過(guò)組織學(xué)觀察，其自然愈合的組織學(xué)變化符合下頜骨骨折正常的愈合規(guī)律。
　　 2.在正常的骨組織細(xì)胞中TGF-β1、BMP-2均呈陰性表達(dá)。在不同時(shí)期的骨痂標(biāo)本中，骨折后第一周的骨痂組織中BMP-2呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而TGF-β1逐漸呈弱陽(yáng)性表達(dá)；骨

8、折后第二周開(kāi)始TGF-β1在組織中的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，而B(niǎo)MP-2的表達(dá)達(dá)到頂峰后逐漸減弱；骨折后第四周二者在骨痂組織中的表達(dá)均進(jìn)一步減弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的觀察。提示在骨折或骨缺損區(qū)域某些具有成骨潛能的未分化間充質(zhì)細(xì)胞可能首先合成并分泌BMP-2，這些細(xì)胞經(jīng)BMP-2誘導(dǎo)后生成大量新生骨組織，其中一些成骨細(xì)胞或軟骨細(xì)胞又可合成TGF-β1，并促進(jìn)其分裂增殖，同時(shí)TGF-β1也可對(duì)局部成骨起促進(jìn)作用。由此可知，在骨折修復(fù)時(shí)局部生長(zhǎng)因