腫瘤壞死因子α對(duì)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)及其骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體的調(diào)控研究.pdf

1、腫瘤壞死因子α(TNF-α)是調(diào)節(jié)骨代謝的重要因子，其濃度的改變與老年性骨質(zhì)疏松及牙槽骨質(zhì)丟失等多種骨性疾病息息相關(guān)。TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)有調(diào)控作用，但其調(diào)控機(jī)制尚不明了；有資料提示TNF-α可能對(duì)于骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)的成骨作用有調(diào)控作用，但其調(diào)控機(jī)制未明。本文通過(guò)對(duì)于觀察TNF-α對(duì)于大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響來(lái)研究TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控作用，并觀察TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體(BMPRs)基因表

2、達(dá)的調(diào)控作用，來(lái)探索TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控作用的分子生物學(xué)機(jī)制。 目的： 觀察TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，研究TNF-α對(duì)成骨細(xì)胞BMPRs的調(diào)控作用，來(lái)探討TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞的分子生物學(xué)調(diào)控機(jī)制。 方法： 1. 大鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：取出生一周內(nèi)的Wistar大乳鼠頭顱骨標(biāo)本，采用酶消化法提取原代成骨細(xì)胞，DMEM完全培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。進(jìn)行三重鑒定：包括形態(tài)、堿性磷酸酶(ALP)活性

3、和礦化結(jié)節(jié)檢測(cè)。 2.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。采用不同濃度TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞，利用MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖的變化；利用PNPP偶氮法檢測(cè)成骨細(xì)胞分化情況。 3.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞各型BMPR基因表達(dá)的影響。采用不同濃度的TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞，利用RT-PCR法檢測(cè)成骨細(xì)胞各型BMPRmRNA量的變化，并以大鼠GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化比較。 結(jié)果： 1.大鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)和鑒

4、定：成功培養(yǎng)出大鼠成骨細(xì)胞，并經(jīng)過(guò)鑒定表明其純度較高。 2.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：MTT法測(cè)定成骨細(xì)胞增殖活性，結(jié)果表明不同濃度TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞增殖均有抑制作用，其中TNF-α濃度大于50ng/ml時(shí)，其吸光度(OD值)有明顯減少，與對(duì)照組的差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PNPP偶氮法測(cè)定成骨細(xì)胞分化程度，結(jié)果表明，各濃度TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞ALP活性均有抑制作用，其中當(dāng)TNF-α濃度大于5ng/ml時(shí)，其OD值

5、有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞各型BMPR基因的表達(dá)：通過(guò)結(jié)果表明各濃度TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞后BMPR-IA和BMPR-Ⅱ的mRNA量均減少，BMPR-IB的mRNA的量有所增加。 結(jié)論： 通過(guò)結(jié)果，本研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞的增殖和分化均有抑制作用，并且對(duì)于成骨細(xì)胞BMPR-IA和BMPR-Ⅱ的表達(dá)有其抑制作用。根據(jù)此結(jié)果可以得出TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞的調(diào)控作用機(jī)制有部分是通過(guò)影