力信號調(diào)控的大鼠成骨細(xì)胞力生長因子表達(dá)及其對成骨細(xì)胞生理行為的影響.pdf

1、本文采用了生物力學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)等方法，研究機(jī)械拉伸對成骨細(xì)胞力生長因子表達(dá)的影響和力生長因子對成骨細(xì)胞增殖和分化以及相關(guān)基因的影響。
　　主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　改進(jìn)了周期性基底膜拉伸應(yīng)變裝置。改進(jìn)后該裝置接種細(xì)胞量大，避免了以往實驗中多次收集細(xì)胞的麻煩。該裝置組裝簡便，應(yīng)變大小可由注入儲液囊的流體體積決定，頻率由控制系統(tǒng)的開關(guān)頻率調(diào)節(jié)，操作方便。
　　運(yùn)用組織塊法培養(yǎng)了滿足實驗需求的大鼠顱骨成

2、骨細(xì)胞，并利用差時貼壁法對其進(jìn)行了純化。通過形態(tài)觀察、Von Kossa染色和堿性磷酸酶（ALP）染色等方法進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明所培養(yǎng)細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的典型生物學(xué)行為，可以用于后續(xù)實驗。第二代至第六代的細(xì)胞用于后續(xù)實驗。
　　對細(xì)胞施加應(yīng)變量為15％周期性拉伸刺激，作用6h、12h、24h、36h后，分別收集細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)，利用western blot法檢測是否有力生長因子（MGF）表達(dá)。結(jié)果顯示，在6h、24h時有少量MGF表

3、達(dá)，12h時較多，對照組和36h未觀察到。
　　以成骨細(xì)胞株MC3T3為對象，研究了力生長因子對細(xì)胞增殖和分化的影響。將力生長因子配成一定濃度的溶液，分別加入到接種細(xì)胞的96孔板中，用MTT法檢測其對細(xì)胞增殖的影響。利用堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測ALP活性，分析其對細(xì)胞分化的影響。結(jié)果顯示，10ng/ml MGF明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，抑制ALP分泌。
　　利用RT-PCR方法分析了加入MGF后細(xì)胞中BMP-2、Cbfα-1、