胡蘆巴調(diào)血脂有效部位篩選及其片劑的制備.pdf

1、目的：
　　針對(duì)傳統(tǒng)藥食兩用植物胡蘆巴及其調(diào)血脂作用的研究現(xiàn)狀，比較胡蘆巴多糖及其降解產(chǎn)物的調(diào)血脂作用，考察多種胡蘆巴提取物調(diào)血脂藥效的分子機(jī)制；并進(jìn)一步分析多糖及其降解產(chǎn)物的粉體學(xué)性質(zhì)、制備并初步評(píng)價(jià)降解多糖片劑，為胡蘆巴降脂藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究及相關(guān)新產(chǎn)品，尤其是保健食品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　前期工作中先以乙醇或蒸餾水分別從胡蘆巴種子粉末中提取醇提物及水提物。醇提物經(jīng)系統(tǒng)溶劑法、大孔樹脂吸附法聯(lián)用制得胡蘆巴

2、總皂苷。水提醇沉法從經(jīng)過醇提的種子殘?jiān)兄频每偠嗵?，并?jīng)進(jìn)一步酶解制備降解多糖。建立高血脂大鼠模型，分別以上述成分給藥后測(cè)定體重、肝/體重比；測(cè)定大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等常規(guī)血脂水平；通過測(cè)定大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶，制備肝臟病理切片，觀察肝臟損傷與修復(fù)作用；以血清丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶評(píng)價(jià)各成分體內(nèi)抗氧化活性。
　　在前期工作基礎(chǔ)上研究各成分的體內(nèi)調(diào)血脂機(jī)制：從給藥末期各

3、組大鼠中分別提取膽固醇、膽汁酸，測(cè)定兩者排泄量；體外對(duì)比多糖、降解多糖與膽固醇膠束結(jié)合的活性；以western blot測(cè)定小腸中NPC1L1、ABCG8的蛋白表達(dá)水平，評(píng)價(jià)各成分對(duì)大鼠體內(nèi)膽固醇吸收的影響。以ELISA法測(cè)定血清HMG-CoA還原酶水平，以qRT-PCR測(cè)定肝臟 CYP7A1、NPC1L1、ABCG8、ABCA1、SR-BI、HMG-CoA還原酶、SREBP-1c的mRNA表達(dá)水平，評(píng)價(jià)各成分對(duì)膽固醇體內(nèi)吸收、代謝、逆

4、轉(zhuǎn)運(yùn)、合成等環(huán)節(jié)的影響。
　　比較分析多糖和降解多糖的粉體學(xué)性質(zhì)。以篩分法測(cè)定粒徑及其分布，固定漏斗法測(cè)定休止角，測(cè)定兩者松密度、振實(shí)密度并計(jì)算Hausner指數(shù)及可壓縮性對(duì)比兩者的流動(dòng)性；通過檢測(cè)粉末在不同濕度環(huán)境的增重情況繪制吸濕標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得臨界相對(duì)濕度；以烏氏粘度計(jì)測(cè)定兩者黏均分子量。濕法制粒壓片工藝制備降解多糖片劑，并對(duì)其進(jìn)行外觀、片重差異、硬度、脆碎度、崩解時(shí)限等質(zhì)量評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：
　　所制備總皂苷純度

5、為80.05％，總多糖純度為75.56%，降解多糖中含還原糖27.78%。通過對(duì)比多糖、降解多糖的調(diào)血脂作用研究中發(fā)現(xiàn)，兩者均能降低動(dòng)物血清中TC、TG、LDL水平，提升HDL水平，表面兩者均能有效調(diào)節(jié)體內(nèi)常規(guī)血脂指標(biāo)；兩者均能抑制ALT值異常升高及脂肪顆粒在肝臟的異常蓄積，提示可能對(duì)高脂飲食下受損肝臟有保護(hù)作用；兩者均提升血清 SOD水平，然而多糖能使體內(nèi) MDA水平異常升高，說明兩者均具有一定的體內(nèi)抗氧化活性，然而多糖效果不如降解多

6、糖。
　　多糖、降解多糖均能在體外與膽固醇膠束結(jié)合，提示兩者可能通過物理作用在腸道結(jié)合膽固醇膠束并促使其排出體外，且降解多糖效果優(yōu)于多糖。皂苷、多糖、降解多糖、水提物均能促進(jìn)膽汁酸排泄，多糖劑量依賴性地促進(jìn)膽固醇排泄，降解多糖效果與高劑量多糖相近。皂苷提升小腸中NPC1L1蛋白表達(dá)，說明其可能促進(jìn)膽固醇、膽汁酸的腸道吸收；促進(jìn)肝臟CYP7A1、ABCA1 mRNA表達(dá)，說明其能促進(jìn)膽固醇的代謝、逆轉(zhuǎn)運(yùn)作用。多糖、降解多糖抑制小腸中

7、NPC1L1蛋白表達(dá)并促進(jìn)ABCG8蛋白表達(dá)，說明其兩者能抑制膽固醇、膽汁酸的腸道吸收。皂苷、多糖、降解多糖均能抑制血清中HMG-CoA還原酶水平及其在肝臟中mRNA表達(dá)，說明各成分均可抑制膽固醇的體內(nèi)合成；而高劑量皂苷可提升SREBP-1c在肝臟中mRNA表達(dá)，說明其可能促進(jìn)甘油三脂的體內(nèi)合成。
　　粉體學(xué)性質(zhì)方面，降解多糖粒徑為（186.54±25.99μm），與多糖（188.01±33.47μm）相近，其粒徑過大（>355μ

8、m）的粉末更少。降解多糖休止角、Hausner指數(shù)明顯小于多糖（P<0.05或P<0.01），體現(xiàn)出較理想的流動(dòng)性及團(tuán)聚性。降解多糖黏度明顯降低，約為原多糖的13%，分子量顯著下降。降解多糖臨界相對(duì)濕度略微高于多糖（65.72%vs.62.84%）、吸濕性下降。制得的降解多糖片劑表面光潔，無(wú)雜斑或異物。片重為146mg，片重差異在±7.5%范圍，硬度為5.40±0.07kg，脆碎度為0.46%，崩解時(shí)限為837.33±9.56s，符合2