朱砂葉螨對(duì)丁氟螨酯的抗性形式遺傳及抗性穩(wěn)定性研究.pdf

1、朱砂葉螨(Tetranychus cinnabarinus)是一種重要的農(nóng)業(yè)害螨，可為害豇豆、茄子、花卉等百余種農(nóng)業(yè)、經(jīng)濟(jì)作物。該螨具有繁殖力強(qiáng)、世代周期短、活動(dòng)范圍小等生物學(xué)特點(diǎn)，加之殺螨劑大量不科學(xué)的使用，使其抗藥性問題尤為嚴(yán)重。丁氟螨酯是一種新型殺螨劑，在我國(guó)上市晚，還未廣泛使用。該藥劑殺螨活性高，對(duì)非靶標(biāo)生物安全，具有成為未來主流殺螨劑的潛力。本論文通過長(zhǎng)期在室內(nèi)進(jìn)行朱砂葉螨對(duì)丁氟螨酯的抗性篩選，分析了朱砂葉螨丁氟螨酯抗性品系的

2、抗性遺傳方式、適合度、抗性穩(wěn)定性，并評(píng)估了丁氟螨酯的抗性風(fēng)險(xiǎn)，研究結(jié)果為丁氟螨酯的合理使用以及抗性治理的有效開展奠定了理論基礎(chǔ)。本文主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：
　　1.以敏感品系（SS）為源頭，室內(nèi)經(jīng)過97代篩選獲得丁氟螨酯抗性品系（CyR），其LC50值由2.19mg/L上升到58.80mg/L，相對(duì)于室內(nèi)敏感品系抗性倍數(shù)為26.85倍。
　　2.利用丁氟螨酯抗性品系與敏感品系進(jìn)行雜交和回交，明確其抗藥性遺傳形式，結(jié)果表明：

3、F1代正交（CyR_80♀×SS♂）及反交（SS♀×CyR_80♂）所得顯性度DRS和DSR分別為-0.24和-0.32，表明朱砂葉螨對(duì)丁氟螨酯的抗性為不完全隱性遺傳；t測(cè)驗(yàn)得出正反交所得D值的95％置信限重疊，不存在顯著性差異，表明抗性基因位于常染色體上；回交F2代期望值與實(shí)際LD-P曲線及χ2值存在明顯差異，表明抗性受多對(duì)等位基因控制。
　　3.通過構(gòu)建抗性品系（CyR）與敏感品系（SS）的生命表，逐日統(tǒng)計(jì)其生長(zhǎng)發(fā)育情況，計(jì)算

4、生物學(xué)參數(shù)，發(fā)現(xiàn) CyR品系的生殖力及存活率均低于 SS品系，相對(duì)適合度（RR/SS）Rf=0.88<1，表明CyR品系存在一定的抗性適合度代價(jià)。
　　4.通過從 CyR_85中分出一支亞系，去除其藥劑篩選壓，研究了朱砂葉螨對(duì)丁氟螨酯的抗性穩(wěn)定性。主要以下三方面來評(píng)價(jià)：
　　首先在藥劑敏感性方面，抗性亞系（CyR_D）在停止藥劑篩選后僅過了5代，其LC50從47.34mg/L下降到11.35mg/L，抗性倍數(shù)從21.6倍下降

5、到5.2倍，12代后抗性倍數(shù)又下降至3.8倍，表明去除藥劑壓力后，CyR_D對(duì)丁氟螨酯的藥劑敏感性逐漸恢復(fù)。
　　其次從生理生化方面，CyR_D在停止藥劑篩選的情況下僅過了5代，三大解毒酶GSTs、MFO、CarE酶活性均發(fā)生顯著性下降，12代后MFO和CarE酶活性下降到敏感水平。表明去除藥劑壓力后，CyR_D解毒酶活性會(huì)逐漸下降。
　　分子生物學(xué)方面，結(jié)合高通量測(cè)序及qPCR驗(yàn)證的結(jié)果，鑒定出10條可能與丁氟螨酯抗性相關(guān)

6、的解毒酶基因，在停止篩選后的不同階段測(cè)定其mRNA表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)TCGST-M2、TCGST-M3、TCGST-M4，TCCarE-4、TCCarE-14，CYP389C11、CYP392D6、CYP385C2，8條原本顯著性上調(diào)表達(dá)的基因在停止篩選12代后表達(dá)量較原表達(dá)水顯著性下降，2條顯著性下調(diào)的基因TCCarE-12、TCCarE-23較原表達(dá)水平顯著上升，表明去除藥劑壓力后，CyR_D解毒酶基因mRNA表達(dá)量呈現(xiàn)不穩(wěn)定性，會(huì)逐漸變

7、化至與敏感品系相當(dāng)?shù)乃健?br>　　藥劑敏感性，解毒酶活性及相關(guān)解毒酶基因mRNA表達(dá)量三方面的結(jié)果均表明朱砂葉螨對(duì)丁氟螨酯的抗藥性不穩(wěn)定。
　　5.應(yīng)用數(shù)量遺傳學(xué)方法估算出朱砂葉螨丁氟螨酯抗性品系的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力h2=0.005，表明其對(duì)丁氟螨酯的抗性發(fā)展較為緩慢?？剐燥L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估表明，在70%-90%致死率的藥劑篩選壓力下，朱砂葉螨對(duì)丁氟螨酯產(chǎn)生10倍抗性需13-36代。通過測(cè)定朱砂葉螨丁氟螨酯抗性品系與5種不同作用殺蟲殺螨劑的