基于高通量測序技術(shù)的朱砂葉螨抗性相關(guān)基因分析.pdf

1、朱砂葉螨(Tetranychuscinnabarinus)是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的世界性害螨，極易產(chǎn)生抗藥性。然而，該物種基因信息的缺乏一直是人們對這一物種抗藥性機制研究的一大阻礙。因此，我們采用高通量測序技術(shù)對朱砂葉螨進行轉(zhuǎn)錄組和數(shù)字基因表達譜（升級版）測序，以擴展該物種的基因信息資源，為抗藥性研究奠定分子基礎。本研究所獲得的主要研究成果如下:
　　 1.通過對朱砂葉螨的轉(zhuǎn)錄組測序，共獲得了該物種45，016條contigs和25，

2、519條unigenes。通過對nr,nt,SwissProt,theClustersofOrthologousGroups(COGs),KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes(KEGG)和GeneOntology(GO)等數(shù)據(jù)庫的BLAST收索(E-value＜0.00001)，最后共有15，167條unigenes被注釋。
　　 2.通過在數(shù)據(jù)庫中手動查找，從朱砂葉螨轉(zhuǎn)錄組中共歸納、整理了10類

3、與殺蟲劑抗藥性有關(guān)的基因，分別為細胞色素P450基因（53條），谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因（24條），羧酸酯酶基因（22條），三磷酸腺苷酶基因（與抗藥性有關(guān)的13條），乙酰膽堿酯酶基因（3條），伽馬氨基丁酸受體基因（16條），鈉離子通道基因(1條)，谷氨酸氯離子通道基因（6條），煙堿型乙酰膽堿受體基因（10條）和細胞色素b基因（13條）。
　　 3.通過對朱砂葉螨敏感和甲氰菊酯抗性品系的數(shù)字基因表達譜測序，分別獲得清楚閱讀7，456，

4、152條和7，072，453條。差異表達基因23，368條，其中有11，090條上調(diào)基因和12，278條下調(diào)基因。顯著差異基因（FDR≤0.001且log2Ratio≥1）有350條，其中上調(diào)和下調(diào)基因分別為137和213條。隨機挑選20條顯著差異基因序列進行qRCR定量驗證，證實本次表達譜的準確率為85％。GO功能顯著性富集分析顯示顯著富集的GOterm共有31個。Pathway顯著性富集分析顯示顯著富集的Pathway共有122條。

5、這些GOterm和Pathway里所包含的基因很可能與甲氰菊酯抗性密切相關(guān)。
　　 4.對表達差異顯著基因篩選，發(fā)現(xiàn)5條可能與甲氰菊酯代謝抗性相關(guān)的解毒酶基因，分別為2條細胞色素P450基因（Unigene12824_A和Unigene20528_A）、2條羧酸酯酶基因（Unigene9913_A和Unigene12325_A）和1條谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因(Unigene9401_A)。之后分別對這5條基因進行表達模式聚類和Pat