基于高通量測(cè)序技術(shù)的朱砂葉螨抗性相關(guān)基因分析.pdf

1、朱砂葉螨(Tetranychuscinnabarinus)是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的世界性害螨，極易產(chǎn)生抗藥性。然而，該物種基因信息的缺乏一直是人們對(duì)這一物種抗藥性機(jī)制研究的一大阻礙。因此，我們采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)朱砂葉螨進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組和數(shù)字基因表達(dá)譜（升級(jí)版）測(cè)序，以擴(kuò)展該物種的基因信息資源，為抗藥性研究奠定分子基礎(chǔ)。本研究所獲得的主要研究成果如下:
　　 1.通過(guò)對(duì)朱砂葉螨的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，共獲得了該物種45，016條contigs和25，

2、519條unigenes。通過(guò)對(duì)nr,nt,SwissProt,theClustersofOrthologousGroups(COGs),KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes(KEGG)和GeneOntology(GO)等數(shù)據(jù)庫(kù)的BLAST收索(E-value＜0.00001)，最后共有15，167條unigenes被注釋。
　　 2.通過(guò)在數(shù)據(jù)庫(kù)中手動(dòng)查找，從朱砂葉螨轉(zhuǎn)錄組中共歸納、整理了10類

3、與殺蟲劑抗藥性有關(guān)的基因，分別為細(xì)胞色素P450基因（53條），谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因（24條），羧酸酯酶基因（22條），三磷酸腺苷酶基因（與抗藥性有關(guān)的13條），乙酰膽堿酯酶基因（3條），伽馬氨基丁酸受體基因（16條），鈉離子通道基因(1條)，谷氨酸氯離子通道基因（6條），煙堿型乙酰膽堿受體基因（10條）和細(xì)胞色素b基因（13條）。
　　 3.通過(guò)對(duì)朱砂葉螨敏感和甲氰菊酯抗性品系的數(shù)字基因表達(dá)譜測(cè)序，分別獲得清楚閱讀7，456，

4、152條和7，072，453條。差異表達(dá)基因23，368條，其中有11，090條上調(diào)基因和12，278條下調(diào)基因。顯著差異基因（FDR≤0.001且log2Ratio≥1）有350條，其中上調(diào)和下調(diào)基因分別為137和213條。隨機(jī)挑選20條顯著差異基因序列進(jìn)行qRCR定量驗(yàn)證，證實(shí)本次表達(dá)譜的準(zhǔn)確率為85％。GO功能顯著性富集分析顯示顯著富集的GOterm共有31個(gè)。Pathway顯著性富集分析顯示顯著富集的Pathway共有122條。

5、這些GOterm和Pathway里所包含的基因很可能與甲氰菊酯抗性密切相關(guān)。
　　 4.對(duì)表達(dá)差異顯著基因篩選，發(fā)現(xiàn)5條可能與甲氰菊酯代謝抗性相關(guān)的解毒酶基因，分別為2條細(xì)胞色素P450基因（Unigene12824_A和Unigene20528_A）、2條羧酸酯酶基因（Unigene9913_A和Unigene12325_A）和1條谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因(Unigene9401_A)。之后分別對(duì)這5條基因進(jìn)行表達(dá)模式聚類和Pat