欖香烯聯(lián)合替莫唑胺對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、[目的]
　　1.觀察欖香烯(ELE)、替莫唑胺(TMZ)以及聯(lián)合用藥對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87及U87干細(xì)胞樣細(xì)胞(GSLC)增殖抑制的影響;
　　2.觀察欖香烯、替莫唑胺以及聯(lián)合用藥分別對(duì)U87及U87GSLC的裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)抑制效果;
　　3.探討欖香烯聯(lián)合替莫唑胺抑制U87及U87GSLC增殖的可能機(jī)制。
　　[方法]
　　1.體外培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87以及U87GSLC，細(xì)胞毒性/增殖檢測(cè)試劑

2、盒(CCK-8)檢測(cè)計(jì)算欖香烯、替莫唑胺不同濃度單藥及欖香烯聯(lián)合不同濃度替莫唑胺處理后的細(xì)胞增殖抑制率;
　　2.分別建立U87、U87GSLC的裸鼠皮下移植瘤模型，各類(lèi)模型分為空白對(duì)照組(Control)、ELE組、TMZ組、ELE+TMZ組，觀察成瘤情況，成瘤后按分組給予藥物腹腔注射處理，觀察給藥后腫瘤生長(zhǎng)情況。
　　3.免疫印跡試驗(yàn)(western blot)檢測(cè)欖香烯、替莫唑胺及聯(lián)合用藥后U87以及U87GSLC內(nèi)的

3、干細(xì)胞自我更新相關(guān)通路蛋白Notch1及堿基切除修復(fù)通路(BER)關(guān)鍵蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表達(dá)水平的變化。
　　[結(jié)果]
　　1.欖香烯和替莫唑胺均可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87及87GSLC增殖，抗腫瘤作用具有劑量依賴(lài)性，相同藥物濃度下，欖香烯對(duì)U87GSLC增殖抑制作用較U87強(qiáng)，而替莫唑胺對(duì)U87增殖抑制作用較U87GSLC強(qiáng)，聯(lián)合用藥效果表現(xiàn)為協(xié)同作用。
　　2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，皮下注射U87

4、GSLC組的裸鼠成瘤的時(shí)間比注射U87組短，U87GSLC移植瘤組瘤體最終體積大小為:空白對(duì)照組＞TMZ組＞ELE組＞ELE+TMZ組;U87移植瘤組瘤體最終體積大小為:空白對(duì)照組＞ELE組＞TMZ組＞ELE+TMZ組。
　　3.免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果示，在U87GSLC中，欖香烯可降低的Notch1的表達(dá)，表達(dá)水平與藥物濃度負(fù)相關(guān)，替莫唑胺對(duì)Notch1的表達(dá)水平無(wú)明顯影響，固定欖香烯濃度聯(lián)合替莫唑胺用藥可使U87GSLC中的Notc

5、h1的表達(dá)水平隨替莫唑胺濃度增加而下調(diào)，但在U87中欖香烯、替莫唑胺單藥及聯(lián)合用藥對(duì)Notch1表達(dá)水平影響不明顯;欖香烯可下調(diào)U87GSLC和U87的PARP-1的表達(dá)，呈濃度依賴(lài)性，而替莫唑胺對(duì)PARP-1無(wú)明顯作用，固定欖香烯濃度聯(lián)合替莫唑胺用藥可使U87GSLC和U87的PARP-1表達(dá)水平隨替莫唑胺濃度增加而下調(diào)。
　　[結(jié)論]
　　1.體外實(shí)驗(yàn)表明，欖香烯及替莫唑胺均具有抗膠質(zhì)瘤增殖的作用，欖香烯對(duì)U87GSLC

6、中的生長(zhǎng)抑制作用強(qiáng)于U87，提示相比于普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞，欖香烯可能對(duì)GSLC具有更高的敏感性，而替莫唑胺在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為對(duì)U87敏感性高于U87GSLC，兩者聯(lián)合應(yīng)用可提高替莫唑胺抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞增殖效果，作用效果表現(xiàn)為協(xié)同作用。
　　2.裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明:在裸鼠皮下，U87GSLC具有比U87更強(qiáng)的致瘤能力，欖香烯對(duì)U87GSLC移植瘤模型的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果好，而替莫唑胺則對(duì)U87移植瘤模型的腫瘤生長(zhǎng)抑制作