EGCG聯(lián)合替莫唑胺對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡的影響及機(jī)制研究.pdf

1、前言：
　　惡性膠質(zhì)瘤的治療一直是神經(jīng)外科學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)。化療是其主要的治療手段之一。替莫唑胺是目前已經(jīng)得到大樣本臨床試驗(yàn)證實(shí)的治療惡性膠質(zhì)瘤的有效藥(盡)管替莫唑胺可有效治療惡性膠質(zhì)瘤的，但是由于其本身的細(xì)胞毒作用并沒有取得令人滿意的控制效果。因此，尋找腫瘤化療輔助藥物，提高替莫唑胺療效，改善患者的生活質(zhì)量、提高生存率，是治療惡性膠質(zhì)瘤的重要課題。表沒食子兒茶素沒食子酸酯((-)-Epigallaocatechin-3-gall

2、ate，EGCG)是綠茶的主要成分。多項(xiàng)研究顯示，EGCG可逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性(Multipledrug resistance，MDR)，有(腫)瘤的耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。對(duì)EGCG和替莫唑胺單獨(dú)應(yīng)用抑制膠質(zhì)瘤的作用已有大量研究結(jié)果，但大部分研究結(jié)果只是闡明了藥物作用的生物學(xué)效果，具體的分子生物機(jī)制一直都不是十分明確。關(guān)于EGCG聯(lián)合替莫唑胺對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用目前未見報(bào)道，因此本研究旨在觀察EGCG聯(lián)合替莫唑胺對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87M

3、G的增殖、凋亡的影響，并初步探討其可能的機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.MTT法檢測(cè)U87MG細(xì)胞活力;
　　2.倒置顯微鏡下觀察U87MG細(xì)胞形態(tài);
　　3.流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)U87MG細(xì)胞凋亡率;
　　4.Westem-blot檢測(cè)NF-kBp65及survivin蛋白表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.EGCG對(duì)人惡性膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞活力的影響
　　不同濃度EGCG(1μM，3μM，

4、10μM，30μM，100μM，300μM)，作用相同時(shí)間，隨著EGCG濃度的增加對(duì)細(xì)胞活力影響增加，相同濃度的EGCG分別作用24，48及72h，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)EGCG對(duì)細(xì)胞活力抑制程度增加。以上結(jié)果提示EGCG以時(shí)間、濃度依賴性模式抑制人惡性膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞活力。
　　2.EGCG聯(lián)合替莫唑胺對(duì)U87MG細(xì)胞增殖的影響
　　與對(duì)照組比較，30μ M EGCG和100μ M替莫唑胺單獨(dú)處理48h后，U87MG細(xì)胞增殖

5、明顯抑制(p＜0.05)。30μ M EGCG和100μ M替莫唑胺聯(lián)合處理瘤細(xì)胞后，細(xì)胞增殖抑制較EGCG和替莫唑胺單獨(dú)處理均更明顯。
　　3.EGCG協(xié)同替莫唑胺誘導(dǎo)人惡性膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞凋亡
　　與對(duì)照組相比，EGCG30μM，替莫唑胺100μM及聯(lián)合處理組作用48h后細(xì)胞凋亡率均明顯增加，差異均具有顯著性(p＜0.05)，其中聯(lián)合處理組作用最顯著。
　　4.EGCG和替莫唑胺聯(lián)合處理對(duì)U87MG細(xì)胞內(nèi)Sur

6、vivin的表達(dá)水平的影響
　　與對(duì)照組相比，100μ M替莫唑胺處理48 h后，U87MG細(xì)胞內(nèi)Survivin蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照明顯增加(p＜0.05)。與此相反的是，30μ M EGCG顯著抑制了Survivin的表達(dá)水平(p＜0.05)。30μ M EGCG和100μM替莫唑胺聯(lián)合處理48小時(shí)之后，與對(duì)照組相比，Survivin蛋白的表達(dá)顯著降低(p＜0.05)。
　　5.EGCG和替莫唑胺聯(lián)合處理抑制U87MG細(xì)

7、胞內(nèi)NF-kBp65的表達(dá)水平
　　與對(duì)照組相比，100μ M替莫唑胺處理48 h后，U87MG細(xì)胞內(nèi)NF-kBp65蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照輕度增加(p＞0.05)。30μm EGCG單獨(dú)處理或聯(lián)合100μM替莫唑胺處理48 h之后，U87MG細(xì)胞內(nèi)NF-kBp65蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照明顯減少(p＜0.05)，且聯(lián)合處理組降低更明顯。
　　結(jié)論:
　　EGCG聯(lián)合替莫唑胺作用，比EGCG，替莫唑胺單獨(dú)應(yīng)用更有效的抑制誘導(dǎo)