高壓氧聯(lián)合替莫唑胺對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、研究目的:
　　 通過體外細(xì)胞試驗(yàn)探索高壓氧聯(lián)合替莫唑胺對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251化療作用的影響及其可能的作用機(jī)制,為高壓氧聯(lián)合化療治療人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)踐依據(jù)。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法:
　　 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251經(jīng)傳代培養(yǎng)后,將實(shí)驗(yàn)對(duì)象分為四個(gè)組:A組高壓氧聯(lián)合替莫唑胺化療組、B組單純高壓氧處理組、C組單純替莫唑胺化療組、D組實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。
　　 1.應(yīng)用MTT法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組U2

2、51細(xì)胞的活性。
　　 2.應(yīng)用PI染色法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組U251細(xì)胞的死亡率。
　　 3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析上述處理因素對(duì)U251細(xì)胞細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。
　　 4.應(yīng)用ELISA法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組U251細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子-1a(HIF-1a)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和多藥耐藥相關(guān)蛋白-1(MRP-1)表達(dá)的影響。
　　 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.在細(xì)胞增殖抑制率上,高壓氧聯(lián)合替莫唑胺組(A

3、組)、單純高壓氧處理組(B組)和單純替莫唑胺化療組(C組),三組細(xì)胞生長(zhǎng)均受抑制。其中高壓氧與化療聯(lián)合處理組(A組)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高,為60.17±4.17％,其次為單純替莫唑胺組(C組),為50.92±3.98％,單純高壓氧處理組(B組)為9.23±2.51％,三之間組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.在細(xì)胞死亡率和凋亡率上,高壓氧聯(lián)合替莫唑胺組(A組)分別為62.54±5.23％和25.23±2.28％,明顯

4、高于其他各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；單純替莫唑胺化療組(C組)分別為40.81±3.32和14.67±1.52％,較聯(lián)合處理組(A組)低,但高于單純高壓氧處理組(B組)和對(duì)照組(D組)(P<0.05)；單純高壓氧處理組(B組)細(xì)胞死亡率為15.12±1.87％,細(xì)胞凋亡率為9.51±0.72％,較對(duì)照組(D組)9.13±0.76％和5.84±0.65％增高明顯(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　

5、 3.經(jīng)高壓氧處理后細(xì)胞增殖周期分布改變,高壓氧聯(lián)合替莫唑胺組(A組)、單純高壓氧處理組(B組)中對(duì)化療療敏感的G2／M期細(xì)胞分布百分比較對(duì)照組(D組)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；單純替莫唑胺組(C)組較對(duì)照組(D組)增高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.在HIF-1a的表達(dá)上,高壓氧聯(lián)合替莫唑胺組(A組)為35.284±3.261 ng／L、單純高壓氧處理組(B組)為39.541±4.035 ng／L較未經(jīng)高壓氧處理組

6、即單純替莫唑胺組(C組)50.415±4.582 ng／L、對(duì)照組(D組)55.218±5.298ng／L下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=2.236)。
　　 5.在VEGF的表達(dá)上,高壓氧聯(lián)合替莫唑胺組(A組)為350.62±20.86ng／L、單純高壓氧處理組(B組)為417.71±16.25 ng／L較未經(jīng)高壓氧處理組即單純替莫唑胺組(C組)684.21±40.28 ng／L、對(duì)照組

7、(D組)750.45±56.72ng／L下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.574)。
　　 6.在MRP-1的表達(dá)上,高壓氧聯(lián)合替莫唑胺組(A組)為835.56±54.26 ng／L、單純高壓氧處理組(B組)為1068.81±50.03 ng／L,較未經(jīng)高壓氧處理組即單純替莫唑胺組(C組)1652.45±30.58 ng／L、對(duì)照組(D組)1535.28±34.98 ng／L下降,差異有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.167)。
　　 四、結(jié)論：
　　 1.高壓氧能夠增強(qiáng)替莫唑胺對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的化療效果。
　　 2.高壓氧能夠誘導(dǎo)U251細(xì)胞死亡和凋亡,抑制U251細(xì)胞生長(zhǎng)。
　　 3.高壓氧能夠改變?nèi)松窠?jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的細(xì)胞周期分布,使細(xì)胞蓄積于G2／M期。
　　 4.高壓氧能夠抑制HIF-1a、VEGF和MRP-1的表達(dá),這可能