cN0期隱匿性頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移喉鱗癌中關(guān)鍵性microRNA表達(dá)譜的研究.pdf

1、研究目的：
　　喉鱗狀細(xì)胞癌（喉鱗癌）頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)對(duì)喉鱗癌的治療及預(yù)后至關(guān)重要，而目前人們對(duì)于相關(guān)的分子機(jī)理及分子標(biāo)志的認(rèn)識(shí)尚有限。本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)，研究喉鱗狀細(xì)胞癌隱匿性頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA(miRNA)表達(dá)譜，篩選cN0期隱匿性頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的喉鱗癌及無(wú)轉(zhuǎn)移者癌組織中差異表達(dá)的miRNA，為深入理解喉鱗癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理，尋找相應(yīng)的分子生物學(xué)標(biāo)志提供理論基礎(chǔ)和研究依據(jù)。
　　研究方

2、法：
　　選取cN0期原發(fā)喉鱗狀細(xì)胞癌患者6例，其中3例術(shù)后病理證實(shí)伴有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，3例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除新鮮癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁正常黏膜組織標(biāo)本，Trizol mirVana?miRNA Isolation Kit試劑盒提取總RNA，經(jīng)Agilent Bioanalyzer2100電泳質(zhì)檢達(dá)芯片雜交質(zhì)控要求后，采用Agilent Human miRNA Microarray version2 Kit，P／N G4470B芯片進(jìn)

3、行RNA樣品標(biāo)記及雜交實(shí)驗(yàn)，洗滌后的芯片經(jīng)Agilent芯片激光掃描儀掃描后采用Feature Extraction軟件提取數(shù)據(jù)，GeneSpring軟件分析數(shù)據(jù)，以t-test檢驗(yàn)篩選在轉(zhuǎn)移組和無(wú)轉(zhuǎn)移組中差異表達(dá)的miRNA(以P值＜0.05和FC值＞2為條件)。
　　研究結(jié)果：
　　共有13個(gè)miRNA在隱匿性轉(zhuǎn)移性喉鱗狀細(xì)胞癌中存在差異表達(dá)，相對(duì)于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中有6個(gè)表達(dá)顯著上調(diào)（FC＞2，P＜0.

4、05），包括：hsa-miR-5194，hsa-miR-1305，hsa-miR-6717-5p，hsa-miR-1260b，hsa-miR-6131，hsa-miR-1288，其中hsa-miR-1288上調(diào)3倍以上；而表達(dá)明顯下調(diào)(FC＜0.5，log2＜-1，P＜0.05)的miRNA有7個(gè)，分別是：hsa-miR-31-3p，hsa-miR-144-5p，hsa-miR-4728-3p，hsa-miR-5196-5p，hsa-m

5、iR-149-5p，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-4417。
　　研究結(jié)論：
　　基因芯片技術(shù)是一種快捷有效的高通量分析喉鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNA表達(dá)譜的檢測(cè)方法。通過(guò)miRNA芯片分析，初步建立起轉(zhuǎn)移性喉鱗狀細(xì)胞癌差異性miRNA表達(dá)譜，共有13個(gè)miRNA：相對(duì)于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，6個(gè)miRNA在伴有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的喉鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)水平顯著上調(diào)，7個(gè)miRNA的表達(dá)水平顯著下調(diào)。這13個(gè)差異表