

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文檔簡介
1、目的:
苯并芘(BaP)是一種廣泛存在于環(huán)境中的雌激素干擾物。課題組前期的研究發(fā)現(xiàn),苯并芘暴露會導(dǎo)致小鼠的妊娠率下降,胚胎著床點明顯減少,雌孕激素及其受體發(fā)生異常改變,證實苯并芘對胚胎著床產(chǎn)生影響,但其的機制還需要進一步探究。胚胎的成功著床取決于胚泡的侵入能力和子宮的功能狀態(tài),子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的平衡對圍著床期子宮功能的建立至關(guān)重要,而這個過程涉及多條通路,其中Wnt信號通路是比較受到關(guān)注的。本研究旨在探討苯并芘對圍著床期小鼠子
2、宮內(nèi)膜Wnt信號通路及細(xì)胞凋亡的影響,為進一步研究苯并芘的生殖毒性提供實驗依據(jù)。
方法:
實驗采用前期已經(jīng)證實的BaP有效劑量0.2mg/kg/d,以灌胃的方式,建立妊娠第1天(D1)至第6天(D6)的染毒孕鼠模型,分別于孕4,5,6天收取子宮內(nèi)膜材料,進行以下實驗:
?、賅estern blot,免疫組化的方法檢測子宮內(nèi)膜容受性的分子HoxA10的蛋白表達(dá)。
?、赗eal-time PCR,West
3、ern blot和IHC檢測Wnt5a,β-catenin和GSK-3β的表達(dá)情況。
?、跿UNEL法檢測子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞的凋亡,Western blot檢測BAX,BCL2,Caspase3表達(dá)。
體外培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞,建立BaP染毒細(xì)胞模型,進行以下實驗:
①Western blot檢測Wnt信號通路相關(guān)基因表達(dá)情況,免疫熒光檢測β-catenin表達(dá)。
?、诹魇郊?xì)胞術(shù)檢測子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋
4、亡情況及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)。
?、墼?BaP染毒同時給予Wnt5a重組蛋白或Wnt5a抑制劑處理,Western blot檢測Wnt信號通路相關(guān)基因及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況
結(jié)果:
?、俦讲④疟┞兜男∈螅訉m內(nèi)膜組織容受性相關(guān)基因HoxA10表達(dá)下降;Wnt5a和β-catenin蛋白表達(dá)上升;抗凋亡基因BCL2表達(dá)上升,促凋亡基因BAX表達(dá)下降,TUNEL檢測子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡下降。
?、隗w外培養(yǎng)人子宮
5、內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)BaP處理后,Wnt信號通路的改變與體內(nèi)實驗基本一致,流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率下降。
?、廴俗訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞給予Wnt5a重組蛋白處理后,Wnt5a蛋白表達(dá)升高,凋亡相關(guān)基因表達(dá)下降,與BaP處理結(jié)果相似;在Wnt5a和BaP處理組分別給予Wnt5a抑制劑處理,可部分恢復(fù)苯并芘誘導(dǎo)的上述改變。
結(jié)論:
由上述的實驗結(jié)果得出結(jié)論:苯并芘通過干擾Wnt信號通路中Wnt5a和β-catenin
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