BaP通過Wnt5a信號(hào)通路干擾孕鼠圍著床期子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：
　　苯并芘(BaP)是一種廣泛存在于環(huán)境中的雌激素干擾物。課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)，苯并芘暴露會(huì)導(dǎo)致小鼠的妊娠率下降，胚胎著床點(diǎn)明顯減少，雌孕激素及其受體發(fā)生異常改變，證實(shí)苯并芘對(duì)胚胎著床產(chǎn)生影響，但其的機(jī)制還需要進(jìn)一步探究。胚胎的成功著床取決于胚泡的侵入能力和子宮的功能狀態(tài)，子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的平衡對(duì)圍著床期子宮功能的建立至關(guān)重要，而這個(gè)過程涉及多條通路，其中Wnt信號(hào)通路是比較受到關(guān)注的。本研究旨在探討苯并芘對(duì)圍著床期小鼠子

2、宮內(nèi)膜Wnt信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡的影響，為進(jìn)一步研究苯并芘的生殖毒性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)采用前期已經(jīng)證實(shí)的BaP有效劑量0.2mg/kg/d，以灌胃的方式，建立妊娠第1天（D1）至第6天（D6）的染毒孕鼠模型，分別于孕4,5,6天收取子宮內(nèi)膜材料，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：
　?、賅estern blot，免疫組化的方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜容受性的分子HoxA10的蛋白表達(dá)。
　?、赗eal-time PCR，West

3、ern blot和IHC檢測(cè)Wnt5a,β-catenin和GSK-3β的表達(dá)情況。
　?、跿UNEL法檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞的凋亡，Western blot檢測(cè)BAX,BCL2,Caspase3表達(dá)。
　　體外培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，建立BaP染毒細(xì)胞模型，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：
　　①Western blot檢測(cè)Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)情況，免疫熒光檢測(cè)β-catenin表達(dá)。
　　②流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋

4、亡情況及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)。
　?、墼?BaP染毒同時(shí)給予Wnt5a重組蛋白或Wnt5a抑制劑處理，Western blot檢測(cè)Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況
　　結(jié)果：
　?、俦讲④疟┞兜男∈?，子宮內(nèi)膜組織容受性相關(guān)基因HoxA10表達(dá)下降；Wnt5a和β-catenin蛋白表達(dá)上升；抗凋亡基因BCL2表達(dá)上升，促凋亡基因BAX表達(dá)下降，TUNEL檢測(cè)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡下降。
　　②體外培養(yǎng)人子宮

5、內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)BaP處理后，Wnt信號(hào)通路的改變與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)基本一致，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率下降。
　?、廴俗訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞給予Wnt5a重組蛋白處理后，Wnt5a蛋白表達(dá)升高，凋亡相關(guān)基因表達(dá)下降，與BaP處理結(jié)果相似；在Wnt5a和BaP處理組分別給予Wnt5a抑制劑處理，可部分恢復(fù)苯并芘誘導(dǎo)的上述改變。
　　結(jié)論：
　　由上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論：苯并芘通過干擾Wnt信號(hào)通路中Wnt5a和β-catenin