鈣敏感受體及緊密連接蛋白-14在草酸鈣結(jié)石大鼠腎組織中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　本研究通過構(gòu)建大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型，觀察CaSR及Claudin-14在兩組大鼠腎組織中的表達變化，同時，觀察CaSR及Claudin-14與大鼠血清BUN、Cr、Ca2+含量、24h尿量、24h尿鈣以及尿pH相關(guān)性。
　　方法：
　　選用成年S-D雄性大鼠30只，隨機分為2組（n=15），對照組和結(jié)石組，采用1％乙二醇自來水自由飲水+2%氯化銨2ml灌胃構(gòu)建大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型；實驗第28天收集實驗大鼠2

2、4h尿液，進行24h尿鈣含量測定。水合氯醛麻醉下腔靜脈穿刺取血4ml，3000r/min4℃離心10min，取上清，檢測血清 BUN、Cr、Ca2+含量；取血后處死實驗大鼠，手術(shù)切取左腎，石蠟包埋后切片行常規(guī) HE染色，同時行免疫組織化學染色觀察CaSR陽性表達情況；RT-PCR法檢測腎臟組織中的Claudin-14mRNA的表達；Western-Blotting法檢測腎臟組織CaSR和Claudin-14蛋白的表達。
　　結(jié)果：

3、
　　1.與對照組比較，結(jié)石組血肌酐、尿素氮顯增高（P＜0.01），結(jié)石組24 h尿鈣排泄量、24h尿量顯著增高（P＜0.01），兩組血鈣水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），兩組間24 h尿pH差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.肉眼可見結(jié)石組大鼠腎組織腫脹，表面點狀分布黃白色結(jié)晶或鈣化。HE染色，普通光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)結(jié)石組大鼠腎組織多數(shù)腎小管管腔內(nèi)彌漫散布無色透明、片狀結(jié)晶。
　　3.光鏡下觀察見CaS

4、R在兩組大鼠腎小管上皮細胞均有不同程度的陽性表達，且結(jié)石組大鼠腎小管上皮細胞CaSR呈彌漫性表達且強度明顯增高。
　　4.與對照組比較，結(jié)石組Claudin-14mRNA顯著增高，組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　5.與對照組比較，結(jié)石組CaSR蛋白含量顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Claudin-14蛋白含量顯著增高，對照組未見表達，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。同時，CaSR和 Claudin

5、-14蛋白表達也存在正相關(guān)(r﹦0.896，P＜0.01)。
　　6. CaSR和Claudin-14蛋白表達與24h尿鈣均呈正相關(guān)，分別為r=0.878，P＜0.01；r=0.934，P＜0.01。
　　結(jié)論：
　　1.采用1％乙二醇自由飲水﹢2％氯化銨每日2mL灌胃可以建立穩(wěn)定的腎草酸鈣結(jié)石大鼠模型。
　　2.CaSR及Claudin-14在結(jié)石組大鼠腎組織中高表達，且與大鼠24h尿鈣排泄呈顯著正相關(guān)，提示C