miRNA和mRNA在草酸鈣結(jié)石模型大鼠腎臟的表達(dá)及意義研究.pdf

1、背景：
　　泌尿系結(jié)石是一種病因復(fù)雜的全球性疾病，其中草酸鈣結(jié)石是最常見的結(jié)石類型。由于發(fā)病機(jī)制不明，缺乏有效的預(yù)防手段，泌尿系結(jié)石的發(fā)病率及復(fù)發(fā)率較高。微小核糖核苷酸（microRNA，miRNA）是一類非編碼的單鏈小分子RNA，可通過促進(jìn)信使RNA（messenger RNA，mRNA）降解和/或抑制其翻譯從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的調(diào)控功能，其表達(dá)量的改變與各種生理及病理狀態(tài)密切相關(guān)。然而迄今為止，miRNA在草酸鈣結(jié)石形成中的

2、作用及具體機(jī)制尚未得到證實(shí)。目的
　　比較草酸鈣結(jié)石模型大鼠與正常大鼠腎組織miRNA表達(dá)譜和mRNA表達(dá)譜的差異，篩選出差異性表達(dá)的miRNA和mRNA，并通過預(yù)測(cè)差異性表達(dá)的miRNA所調(diào)控的靶基因，初步分析miRNA在草酸鈣結(jié)石形成過程中的功能及相關(guān)機(jī)制，為進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　將16只6—8周齡的雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組，每組8組。正常組每天自由飲水，造模組使用乙二醇和氯化銨誘導(dǎo)法

3、構(gòu)建大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型，28天后收集大鼠24小時(shí)尿液并處死大鼠提取腎臟組織標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)以評(píng)估造模成功性。提取兩組大鼠腎皮質(zhì)組織總RNA，應(yīng)用微陣列芯片檢測(cè)其miRNA及mRNA表達(dá)譜，篩選出兩組間差異表達(dá)的miRNA和mRNA，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）驗(yàn)證芯片結(jié)果，并通過 TargetScan等數(shù)據(jù)庫(kù)及 mRNA差異表達(dá)譜結(jié)果預(yù)測(cè)差異性表達(dá)miRNA調(diào)控的靶基因，應(yīng)用Gene Ontology數(shù)據(jù)庫(kù)和KEGG信號(hào)

4、通路數(shù)據(jù)庫(kù)初步分析miRNA及其靶基因在草酸鈣結(jié)石形成過程中的功能及作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　造模組大鼠24小時(shí)尿液草酸排泄量相比正常組更高，而尿鈣則較低。偏光顯微鏡下觀察腎臟組織切片，正常組未見草酸鈣晶體，造模組可見大量草酸鈣晶體。微陣列芯片結(jié)果表明，兩組之間共38個(gè)miRNA表達(dá)有顯著差異（與正常組相比，造模組上調(diào)18個(gè)，下調(diào)20個(gè)）；兩組之間共2728個(gè)mRNA表達(dá)有顯著差異（與正常組相比，造模組上調(diào)1350個(gè)，下調(diào)

5、1378個(gè)）。選取15個(gè)差異表達(dá)的miRNA和10個(gè)mRNA進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證，結(jié)果表明與芯片結(jié)果基本吻合，芯片檢測(cè)結(jié)果可靠。預(yù)測(cè)34個(gè)差異表達(dá)的miRNA共調(diào)控328個(gè)靶基因表達(dá)，Gene Ontology分析及KEGG信號(hào)通路分析表明這些靶基因與離子轉(zhuǎn)運(yùn)、炎癥損傷、氧化應(yīng)激等方面密切相關(guān)，并可能通過細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用，縫隙連接，細(xì)胞粘附，趨化因子信號(hào)通路等相關(guān)的生物學(xué)通路參與結(jié)石形成的過程。
　　結(jié)論：