雌激素β受體在草酸鈣結石形成中的作用及機制研究.pdf

1、研究背景：
　　泌尿系結石為泌尿外科最常見的良性疾病之一。草酸鈣結石為最常見的腎結石類型，約占腎結石的80％。臨床上成年女性草酸鈣結石發(fā)病率遠低于男性，此外女性結石患者其體內雌激素水平遠低于無結石的正常女性，提示雌激素/雌激素受體(Estrogen Receptor，ER)信號途徑可能具有抑制草酸鈣結石形成作用。然而，目前國內外有關雌激素對于腎結石形成的作用研究主要局限于激素本身，而對其受體在腎結石，尤其是草酸鈣結石形成過程中的作

2、用，及其相關分子信號通路機制上尚未闡明。
　　研究目標：
　　本研究系統(tǒng)性的探討 ERβ介導的信號通路在草酸鈣結石形成過程中的作用及其具體的分子機制。探討草酸鈣結石性別差異性發(fā)病的原因，從而拓展泌尿系結石病因及預防的研究思路，為改進泌尿系結石的治療方案提供理論依據及支持。
　　研究方法：
　　1）建立沉默ERβ人類肝細胞系（HepG2）,在體外培養(yǎng)觀察ERβ對肝臟細胞草酸合成的影響以及進一步探尋 ERβ影響肝臟草

3、酸合成的具體分子生物學機制。
　　2）分別建立正常人類腎小管上皮細胞、沉默 ERα腎小管上皮細胞、沉默ERβ腎小管上皮細胞系，在體外草酸的環(huán)境培養(yǎng)以探尋ER對于草酸引起的腎小管上皮細胞氧化應激損傷方面的影響。
　　3）建立全身性ERβ敲除雌性小鼠草酸鈣結石模型，通過體內實驗驗證ERβ信號通路在草酸鈣結石形成過程中的具體作用及機制。
　　研究結果：
　　1）通過shRNA使HepG2細胞沉默ERβ后，細胞合成草酸能

4、力增加，提示 ERβ可減少肝細胞草酸合成，機制研究表明 ERβ可直接結合于丙氨酸乙醛酸氨基轉移酶（alanine-glyoxylate aminotransferase, AGT1）基因的啟動子區(qū)域，增強AGT1的表達，從而減少肝細胞草酸的合成。
　　2）在草酸培養(yǎng)環(huán)境下，腎小管上皮細胞沉默 ERβ后，細胞內的氧化應激水平及細胞損傷程度將急劇增加，提示ERβ可以減少草酸引起的腎小管上皮細胞氧化應激損傷，從而減少晶體的粘附。機制研究

5、結果進一步表明ERβ可直接抑制NADPH氧化酶2（NADPH Oxidase2, NOX2）的表達從而減少細胞內氧化應激水平及細胞損傷程度。
　　3）經過7天腹腔注射乙醛酸誘導小鼠腎臟草酸鈣結石形成，ERβ敲除雌性小鼠相比野生型雌性小鼠，腎臟草酸鈣晶體數目明顯增加，24小時尿液排泄草酸明顯增加，同時肝臟AGT1表達減少，腎臟NOX2表達增加以及腎臟氧化應激水平急劇增高。利用NOX2特異性抑制劑apocynin可以部分逆轉ERβ敲除