成人胰島細(xì)胞分離純化及免疫抑制劑對(duì)胰島細(xì)胞功能影響的試驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：1在現(xiàn)有的設(shè)備及試驗(yàn)條件下，改進(jìn)胰島分離、純化技術(shù)，獲得較大量的有活性的胰島團(tuán)簇。探討胰島分離純化方法及胰島細(xì)胞移植物質(zhì)量的鑒定方法。2.通過(guò)體外人胰島細(xì)胞培養(yǎng)及糖刺激胰島素釋放試驗(yàn)，探討免疫抑制劑對(duì)人胰島細(xì)胞的直接毒性作用，旨在篩選適用于胰島細(xì)胞移植的免疫抑制劑。設(shè)計(jì)既能有效的免疫抑制且對(duì)胰島存活毒性小的免疫抑制方案。為臨床移植提供理論依據(jù)。 研究方法：完善尸體胰腺切取技術(shù)，減少冷熱缺血時(shí)間，經(jīng)胰導(dǎo)管逆行注入膠原酶，

2、采用膽總管內(nèi)逆行灌注膠原酶消化分離胰島，F(xiàn)icoll間斷密度梯度離心法提純胰島，采用DTZ和AO-PI聯(lián)合染色及糖刺激胰島素釋放試驗(yàn)鑒定胰島的純度、數(shù)量和活率和功能質(zhì)量。通過(guò)人胰島細(xì)胞同不同免疫抑制劑分別共同培養(yǎng)后的糖刺激胰島素釋放試驗(yàn)，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)液中胰島素含量比較，以探討免疫抑制劑對(duì)胰島素的毒性作用。 結(jié)果：1.人的胰腺經(jīng)消化分離提出后胰島產(chǎn)量為80×1000胰島當(dāng)量，平均活率在95％以上，純度在80％以上。胰島素釋放

3、試驗(yàn)顯示高糖刺激后胰島素釋放量為低糖的2.8倍，表明胰島細(xì)胞功能良好。2.與對(duì)照組相比，各藥物添加組胰島素釋放均有變化，除5ng/ml它可莫斯組的在低糖濃度時(shí)胰島素釋放增大外，其余各組在低糖、高糖濃度作用下胰島素釋放減少。低糖組，與對(duì)照組相比只有25ng/ml它可莫斯組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；高糖作用下，高濃度的環(huán)孢霉素、雷帕霉素、霉酚酸酯和中、高它可莫斯同對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其他各組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在相同藥物隨著

4、濃度的增高而減少，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組相比，所有添加藥物組刺激指數(shù)都下降，只有高濃度(25ng/ml)它可莫斯組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其余各組無(wú)明顯差異。 結(jié)論：改良的酶法分離、Ficoll梯度離心法純化胰島，是當(dāng)今條件下可行的胰島分離提純方法。DTZ染色、AO/PI雙色熒光染色和糖刺激胰島素釋放試驗(yàn)三者結(jié)合是鑒定胰島移植物數(shù)量與質(zhì)量的一種簡(jiǎn)單、可靠的方法。2.現(xiàn)在臨床應(yīng)用的高濃度免疫抑制劑和中濃度的普樂(lè)可復(fù)對(duì)胰