甘露糖受體在哮喘大鼠模型中作用的研究.pdf

1、第一部分:甘露糖受體在哮喘大鼠肺組織中的表達(dá)變化
　　研究目的
　　研究哮喘模型SD大鼠肺組織中甘露糖受體基因和蛋白表達(dá)水平的變化。
　　材料與方法
　　建立哮喘SD大鼠模型。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western-blot方法檢測(cè)肺組織中甘露糖受體(MR)蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用RealTime-PCR方法檢測(cè)肺組織中MR基因表達(dá)水平。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　哮喘組大鼠肺組織中MR基因和蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著升

2、高(P<0.05)。
　　結(jié)論
　　哮喘組大鼠肺組織中MRmRNA和蛋白表達(dá)均較對(duì)照組明顯增高,提示MR可能與哮喘的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。
　　第二部分:甘露糖受體在哮喘大鼠模型肺泡巨噬細(xì)胞和氣道平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)變化及其對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)吞活性的影響
　　研究目的
　　1、研究SD大鼠在哮喘狀態(tài)下,肺泡巨噬細(xì)胞(AMs)甘露糖受體的表達(dá)變化,及其對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)吞活性的影響。
　　2、研究SD大鼠在哮喘狀態(tài)下

3、,氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)甘露糖受體的表達(dá)變化。
　　材料與方法
　　建立哮喘SD大鼠模型,麻醉后行支氣管肺泡灌洗,分離并培養(yǎng)肺泡灌洗液(BALF)中AMs,處死后培養(yǎng)原代氣道平滑肌細(xì)胞,取3~5代ASMCs。
　　實(shí)驗(yàn)分組:
　　(1)對(duì)照組(N組):即為正常對(duì)照組大鼠細(xì)胞,無任何干預(yù)刺激;
　　(2)哮喘組(A組):即為哮喘組大鼠細(xì)胞,不加任何干預(yù)刺激;
　　(3)哮喘+白細(xì)胞介素4(IL-4

4、)組(A+I組):哮喘組大鼠細(xì)胞加入10μg/ml重組大鼠IL-4刺激24小時(shí);
　　(4)哮喘+D-(+)-甘露糖(mannose)組(A+M組):哮喘組大鼠細(xì)胞加入50μmol/mlD-(+)-mannose刺激24小時(shí)。
　　(5)哮喘+甘露糖受體小干擾RNA組(A+R組):哮喘組大鼠細(xì)胞20μmol/mlMRsiRNA刺激24小時(shí);
　　(6)哮喘+白細(xì)胞介素4+D-(+)-甘露糖(mannose)組(A+I+

5、M組):哮喘組大
　　鼠細(xì)胞同時(shí)加入10μg/mlIL-4和50μmol/mlD-(+)-mannose刺激24小時(shí)。應(yīng)用免疫熒光方法檢測(cè)各組細(xì)胞中MR蛋白水平的表達(dá);Real-TimePCR檢測(cè)各組ASMCs中MR基因水平的表達(dá)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組AMs內(nèi)吞活性的改變;ELISA檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4的含量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1、對(duì)比對(duì)照組,哮喘組大鼠BALF上清中IL-4的含量明顯升高

6、,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　2、對(duì)比對(duì)照組,哮喘組、哮喘+M組大鼠AMsMR蛋白水平表達(dá)均升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);對(duì)比哮喘組大鼠,AMs經(jīng)IL-4干預(yù)后,MR蛋白水平表達(dá)較對(duì)照組AMs增加(p<0.01);經(jīng)D-(+)-mannose干預(yù)后AMsMR蛋白水平表達(dá)無明顯變化;經(jīng)MRsiRNA干預(yù)后AMsMR蛋白水平的表達(dá)降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);經(jīng)D-(+)-mannose和IL-

7、4干預(yù)后且AMsMR蛋白水平的表達(dá)增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05);
　　3、對(duì)比對(duì)照組大鼠,哮喘組大鼠AMs的內(nèi)吞活性升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);對(duì)比哮喘組大鼠,AMs經(jīng)IL-4干預(yù)后,內(nèi)吞活性升高(p<0.05);D-(+)-mannose干預(yù)后AMs的內(nèi)吞活性降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);經(jīng)MRsiRNA干預(yù)后AMs的內(nèi)吞活性降低(p<0.05);經(jīng)D-(+)-mannose和IL-4干預(yù)后

8、且AMs的內(nèi)吞活性降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　4、對(duì)比對(duì)照組,哮喘組、哮喘+M組大鼠ASMCsMR基因和蛋白水平表達(dá)均升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);對(duì)比哮喘組大鼠,ASMCs經(jīng)IL-4干預(yù)后,MR蛋白(p<0.01)和基因水平(p<0.05)表達(dá)均增加;經(jīng)D-(+)-mannose干預(yù)后ASMCsMR蛋白和基因水平的表達(dá)無明顯變化;經(jīng)MRsiRNA干預(yù)后ASMCsMR的蛋白(p<0.01)和基因(

9、p<0.05)水平表達(dá)降低;經(jīng)D-(+)-mannose和IL-4干預(yù)后且ASMCsMR的蛋白和基因水平表達(dá)增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　結(jié)論
　　在大鼠哮喘狀態(tài)下,AMs、ASMCs中MR蛋白水平的表達(dá)均升高,ASMCsMR基因水平的表達(dá)升高;IL-4刺激可以上調(diào)MR基因和蛋白水平表達(dá);AMs的內(nèi)吞活性較對(duì)照組升高,且MR與AMs的內(nèi)吞活性相關(guān)。以上結(jié)果提示,哮喘狀態(tài)下,MR的表達(dá)上調(diào),可能參與AMs內(nèi)吞