食管癌中PTEN，p27和PCNA的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：食管癌是消化道中常見(jiàn)的惡性腫瘤，近幾年來(lái)隨著癌基因、抑癌基因的提出，使人們對(duì)腫瘤的研究進(jìn)入了分子的水平。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞周期的調(diào)控失常有關(guān)，其主要的調(diào)控點(diǎn)在G1期，它決定著細(xì)胞是否通過(guò)G1期進(jìn)入S期，繼續(xù)細(xì)胞周期的進(jìn)程。細(xì)胞周期的正常進(jìn)行與多種因素有關(guān)。PTEN和p27在細(xì)胞周期的調(diào)控中起著重要的作用。它們的表達(dá)與胃癌，腸癌等多種腫瘤之間的關(guān)系在相關(guān)文獻(xiàn)中已有報(bào)道，而在食管癌中的表達(dá)意義及相互關(guān)系的報(bào)道甚少。PCNA為增殖細(xì)

2、胞核抗原，其陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)百分率可作為反映細(xì)胞增殖活性的重要參考指標(biāo)。本試驗(yàn)采用免疫組化技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)，從定性和定量的角度檢測(cè)并分析了PTEN、p27、PCNA在正常的食管粘膜上皮和高、中、低分化的食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，并以PCNA陽(yáng)性細(xì)胞百分率為依據(jù)，標(biāo)定PCNA表達(dá)級(jí)數(shù)，較客觀(guān)的判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，評(píng)估細(xì)胞的生物學(xué)活性及所處的生長(zhǎng)狀態(tài)，從而弄清PTEN、p27、PCNA在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中所扮演的角色，為食管癌的基因診斷、

3、判斷預(yù)后提供理論依據(jù)。 方法：1應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)23例正常的食管粘膜上皮和70例食管鱗狀細(xì)胞癌中PTEN，p27，PCNA基因蛋白的表達(dá)。 2用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)對(duì)5例正常的食管粘膜，30例食管鱗狀細(xì)胞癌中的PTEN、p27基因蛋白表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。 3應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包(12.0版)對(duì)所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行x2檢驗(yàn)，相關(guān)分析、t檢驗(yàn)、方差分析(F檢驗(yàn))。 結(jié)果：研究材料取自河北醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)

4、院病理科2004-2005年經(jīng)手術(shù)切除的食管癌標(biāo)本70例，全部病例均經(jīng)病理檢查證實(shí)為鱗癌。由兩位年資較高的病理科醫(yī)生根據(jù)1990年WHO食管癌的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將其分為高、中、低分化三級(jí)，高分化鱗癌23例，中分化鱗癌30例、低分化鱗癌17例；有淋巴轉(zhuǎn)移的鱗癌33例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的鱗癌37例；有纖維膜浸潤(rùn)的鱗癌56例，無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的鱗癌14例。另取距腫瘤≥5cm的正常組織23例作對(duì)照。(見(jiàn)圖1～4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1PTEN基因的表達(dá)1.1

5、免疫組織化學(xué)PTEN基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞核，在23例正常的食管粘膜上皮中有21例(91.30％)表達(dá)陽(yáng)性；在70例食管鱗狀細(xì)胞癌中有32例(45.71％)表達(dá)陽(yáng)性；高、中、低分化的鱗狀細(xì)胞癌的陽(yáng)性表達(dá)率分別為73.91％(17/23)、36.67％(11/30)，23.53％(4/17)，有、無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性表達(dá)率分別為30.30％(10/33例)、59.46％(22/37)，有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的陽(yáng)性表達(dá)

6、率分別為39.29％(22/56)、71.43％(10/14)。在正常的食管粘膜上皮和食管鱗狀細(xì)胞癌之間；高、中、低分化的食管鱗狀細(xì)胞癌之間；有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗狀細(xì)胞癌之間；以及有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管癌鱗狀細(xì)胞癌之間的PTEN基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均具有明顯差異(P＜0.05)(Table1，F(xiàn)ig.5～Fig.8)。 1.2流式細(xì)胞檢測(cè)隨機(jī)取5例正常食管粘膜上皮和食管鱗癌30例，高、中、低分化的食管鱗癌各占10例；12例發(fā)

7、生了淋巴轉(zhuǎn)移；24例發(fā)生了纖維膜浸潤(rùn)。對(duì)其PTEN基因蛋白表達(dá)量(FI)進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè)。測(cè)得正常的食管粘膜上皮表達(dá)量為1.00±0.14，鱗癌中的表達(dá)量為0.76±0.20；高、中、低分化的食管鱗癌中的表達(dá)量分別為1.01±0.17、0.79±0.09、0.40±0.19；有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌的表達(dá)量分別為0.65±0.21、0.83±0.15；有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管鱗癌的表達(dá)量分別為0.65±0.21、0.91±0.14。在正

8、常的食管粘膜上皮和食管鱗狀細(xì)胞癌之間；高、中、低分化的食管鱗狀細(xì)胞癌之間；有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗狀細(xì)胞癌之間；以及有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管癌鱗狀細(xì)胞癌之間的PTEN基因蛋白表達(dá)量(FI)均具有明顯差異(P＜0.05)。此結(jié)果與免疫組化結(jié)果相一致(Table2，F(xiàn)ig.a～Fig.e)。 2p27基因蛋白的表達(dá)2.1免疫組織化學(xué)p27基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，主要在胞核中表達(dá)，在23例正常的食管粘膜上皮中有17例(7

9、3.91％)表達(dá)陽(yáng)性；在70例食管鱗狀細(xì)胞癌中有35例(50.00％)表達(dá)陽(yáng)性；高、中、低分化的鱗狀細(xì)胞癌的陽(yáng)性表達(dá)率分別為78.26％(18/23)、40.00％(12/30)、29.41％(5/17)；有、無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的鱗狀細(xì)胞癌陽(yáng)性表達(dá)率分別為30.30％(10/33)、67.57％(25/37)；有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的鱗狀細(xì)胞癌陽(yáng)性達(dá)率分別為48.21％(27/56)、57.14％(8/14)。在正常的食管粘膜上皮和食管鱗狀細(xì)胞癌之間

10、；高、中、低分化的鱗狀細(xì)胞癌之間；有、無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的鱗狀細(xì)胞癌之間，p27基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均具有明顯差異(P＜0.05)，而在有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管癌之間p27基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率元明顯差異(P＞0.05)(Table3，F(xiàn)ig.9～Fig.12)。 2.2流式細(xì)胞檢測(cè)隨機(jī)取5例正常食管粘膜上皮和食管鱗癌30例，高、中、低分化的食管鱗癌各占10例；12例發(fā)生了淋巴轉(zhuǎn)移；24例發(fā)生了纖維膜浸潤(rùn)。對(duì)其p27基因蛋白表達(dá)量(FI)進(jìn)

11、行流式細(xì)胞檢測(cè)。測(cè)得正常的食管粘膜上皮表達(dá)量為1.00±0.19，鱗癌中的表達(dá)量為0.73±0.22；高、中、低分化的食管鱗癌中的表達(dá)量分別為1.11±0.17、0.71±0.14、0.43±0.13；有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌的表達(dá)量分別為0.64±0.27、0.73±0.19；有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管鱗癌的表達(dá)量分別為0.71±0.21、0.79±0.23。在正常的食管粘膜上皮和食管鱗狀細(xì)胞癌之間；高、中、低分化的食管鱗狀細(xì)胞癌之間的

12、p27基因蛋白表達(dá)量(FI)均具有明顯差異(P＜0.05)，而在有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管鱗狀細(xì)胞癌之間p27基因蛋白表達(dá)量(FI)沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)。以上結(jié)果與免疫組化結(jié)果相一致。有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌鱗狀細(xì)胞癌之間的p27基因蛋白表達(dá)量(FI)沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)。此結(jié)果與免疫組化結(jié)果不一致(Table4，F(xiàn)ig.f～Fig.j)。 3PCNA蛋白的表達(dá)PCNA基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，主要定位于

13、細(xì)胞核，在正常食管黏膜中主要見(jiàn)于基底層上方的1-2層副基底細(xì)胞，23例正常組織中有2例(8.70％)表達(dá)陽(yáng)性。在70例食管鱗狀細(xì)胞癌中有49例(70.00％)表達(dá)陽(yáng)性；高、中、低分化的鱗狀細(xì)胞癌的陽(yáng)性表達(dá)率分別為47.83％(11/23)、73.33％(22/30)、94.12％(16/17)；有、無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性表達(dá)率分別為84.85％(28/33)、56.76％(21/37)；有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的陽(yáng)性達(dá)率分別為80.36％(45/56

14、)、28.57％(4/14)。在正常的食管粘膜上皮和食管鱗狀細(xì)胞癌之間；高、中、低分化的食管鱗癌之間；有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌之間；以及有、無(wú)纖維膜浸潤(rùn)的食管鱗癌之間，PCNA基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均具有明顯差異(P＜0.05)。(Table5，F(xiàn)ig.13～Fig.16)。 4食管鱗狀細(xì)胞癌中PTEN、p27基因蛋白的表達(dá)之間的關(guān)系PTEN基因蛋白的表達(dá)與p27基因蛋白的表達(dá)之間呈正相關(guān)(X2=11.283，p＜0.05)(T

15、able6)。 5食管鱗狀細(xì)胞癌中PTEN、p27的表達(dá)與PCNA標(biāo)定級(jí)數(shù)之間的關(guān)系PTEN蛋白的表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌中PCNA標(biāo)定級(jí)數(shù)之間存在負(fù)相關(guān)(pearson's列聯(lián)系數(shù)R=-0.424，P＜0.05)；P27蛋白的表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌中PCNA標(biāo)定級(jí)數(shù)之間也存在負(fù)相關(guān)，(pearson's列聯(lián)系數(shù)R=-0.369，P＜0.05)(Table7、8)。 結(jié)論1.食管鱗狀細(xì)胞癌中PTEN基因蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率以及表達(dá)

16、量比正常粘膜上皮顯著降低，并與腫瘤的分化程度，腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)深度、轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)，說(shuō)明PTEN的表達(dá)下降或是缺失可作為食管鱗癌的診斷指標(biāo)之一。 2.p27基因蛋白的失表達(dá)是促使食管鱗癌發(fā)生的原因之一，并且在腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也起著一定的促進(jìn)作用，但可能與腫瘤的浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。 3.PCNA蛋白的表達(dá)在正常的食管上皮明顯低于食管鱗癌，并隨著腫瘤惡性程度升高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生和浸潤(rùn)深度的增加，PCNA蛋白的陽(yáng)性表達(dá)

17、率明顯升高，說(shuō)明腫瘤發(fā)生后細(xì)胞增殖活性明顯增高，并且分化越低的腫瘤細(xì)胞增殖活性越高，而增殖活性越高的腫瘤越容易發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。 4.在食管鱗癌中PTEN基因蛋白的表達(dá)與p27基因蛋白表達(dá)之間呈正相關(guān)，說(shuō)明PTEN可能是通過(guò)上調(diào)p27的表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞周期，達(dá)到抑制腫瘤的作用。 5.在食管鱗癌中PTEN的表達(dá)與PCNA標(biāo)定級(jí)數(shù)之間呈負(fù)相關(guān)；p27基因蛋白表達(dá)與PCNA標(biāo)定級(jí)數(shù)之間也呈負(fù)相關(guān)。說(shuō)明PTEN、p27的失活或表達(dá)下