PTEN和P27在人腦星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文PTEN和P27在人腦星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)及意義姓名：吳永剛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：王成林20050401目的PTEN和P27均對(duì)細(xì)胞增殖起負(fù)性調(diào)控作用，它們的表達(dá)異常與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)在檢測(cè)原發(fā)性星形細(xì)胞腫瘤中PTEN和P27表達(dá)情況的同時(shí)，對(duì)這兩個(gè)抑癌基因的表達(dá)程度與腫瘤病理分級(jí)之間的關(guān)系進(jìn)行了評(píng)估。方法一、標(biāo)本來(lái)源46例原發(fā)性星形細(xì)胞腫瘤標(biāo)本和10例非腫瘤腦組織標(biāo)本均為中國(guó)醫(yī)

2、科大學(xué)附屬第二醫(yī)院神經(jīng)外科2002年3月2004年3月手術(shù)切除標(biāo)本，所有腫瘤均按照WH02000年制定的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)重新確定病理診斷和分級(jí)，其中包括WHOI級(jí)11例，Ⅱ級(jí)13例，Ⅲ級(jí)12例，Ⅳ級(jí)10例。二、免疫組化染色方法全部56例標(biāo)本經(jīng)甲醛固定和石蠟包埋后，進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)PTEN和P27表達(dá)。具體步驟如下：首先將石蠟標(biāo)本制成5微米厚切片，常規(guī)二甲苯脫蠟酒精至水后，浸入3％H：O：溶液中，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性

3、過(guò)氧化物酶的活性。切片浸人001M枸櫞酸溶液(PH=6O)中，用500W微波爐加熱進(jìn)行微波抗原修復(fù)15分鐘。切片滴加正常二抗動(dòng)物血清封閉，室溫下孵育30分鐘，消除非特異性反應(yīng)。切片分別滴加抗PTEN和P27單克隆抗體，在4℃恒溫箱中孵育過(guò)夜，然后滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育90分鐘。應(yīng)用超敏SP試劑盒，按照SP法常規(guī)顯色。最后用蘇木素復(fù)染切片。凡細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒者定義為PTEN陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒者定義為1