在線及離線富集技術(shù)在痕量毒性成分分析中的研究與應(yīng)用.pdf

1、藥物中的某些毒性成分，在一定劑量下呈現(xiàn)毒性，但在較低劑量下還具有一定的生理活性，這類成分又可稱為毒效成分。其中，烏頭類生物堿是典型的毒效成分，中毒劑量為0.2mg.kg-1，致死量為2.5mg;但在較低劑量下又具有顯著的生理活性，廣泛應(yīng)用于臨床治療中。因此，對于含有烏頭屬植物的中藥制劑，烏頭堿的分析測定對保證用藥安全有效具有重要意義。
　　 附子理中丸是一種傳統(tǒng)的中藥制劑，處方中，附子作為君藥，有效成分為烏頭類生物堿。課題建立了

2、毛細(xì)管電泳場放大在線富集技術(shù)(FASS-CE)快速檢測附子理中丸中的烏頭堿類毒性成分的方法。根據(jù)烏頭堿類的堿性性質(zhì)，加酸以除去脂溶性雜質(zhì)，之后堿化，乙醚萃取除去水溶性雜質(zhì)。運行緩沖溶液為50mmol·L-1磷酸鹽緩沖溶液(pH=8.5)-乙腈(60∶40);在進(jìn)樣之前預(yù)進(jìn)水柱5s，采用電遷移進(jìn)樣，進(jìn)樣電壓12kV，進(jìn)樣時間15s;運行電壓10kV;紫外檢測波長為235nm;結(jié)果表明，烏頭堿和次烏頭堿分別在15.6～1.0×103μg·L

3、-1，31.25～2.0×103μg·L-1線性關(guān)系良好，回收率分別為98.7％和97.1％，RSD分別為3.1％及2.1％。所建方法大大提高了烏頭堿類生物堿的專屬性和靈敏度，使檢測靈敏度提高了400倍。為含有烏頭類生物堿的限量檢測提供了一種新型、可靠、方便實用的分析手段。
　　 參附注射液源于古方“參附湯”，是以紅參、附子為主要成分的中藥注射液，具有回陽救逆，益氣固脫的作用。在其生產(chǎn)過程中，除對附子藥材的炮制處理有嚴(yán)格的要求外

4、，還需通過特有的水解轉(zhuǎn)化等工藝降低其毒性。制劑中的烏頭類生物堿含量極低，由于常規(guī)分析儀器靈敏度的限制，通常僅進(jìn)行限量檢查，以確保用藥安全，但是往往忽略了附子作為中藥方劑中君藥的藥學(xué)學(xué)地位，為正確評價附子的君藥藥效學(xué)作用，迫切需要建立高靈敏度的檢測方法對其進(jìn)行定量檢測。課題采用具有純化富集能力的HF-LPME法，結(jié)合UPLC-MS/MS，建立了參附注射液中三種痕量附子指標(biāo)成分的含量測定方法。樣品首先經(jīng)HF-LPME進(jìn)行純化富集，采用ACQ

5、UITYUPLCBEHC18色譜柱(50mm×2.1mm，1.7μm)，乙腈-10mmol·L-1NH4HCO3溶液(pH=10)為流動相，流速為0.45mL·min-1，梯度洗脫。電噴霧電離(ESI)、多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式進(jìn)行含量測定。結(jié)果表明，烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿在0.1-100ng·L-1線性關(guān)系良好，r＞0.999，檢測限分別為0.03，0.03，0.02ng·L-1，平均加樣回收率分別為100.1％，97.4％，97

6、.5％;RSD分別為1.2％，1.1％，1.5％。本方法能夠定量分析制劑中3種痕量烏頭類生物堿的含量，不僅保證了參附注射液的用藥安全，同時體現(xiàn)了方中附子的君藥藥效學(xué)作用，為含有附子的中藥制劑的質(zhì)量控制提供了可靠方便而實用的檢測手段。
　　 烏頭類生物堿植物種類較多，民間使用廣泛，但其毒性較強，引發(fā)的中毒事件屢有發(fā)生。但由于其在體內(nèi)代謝迅速，取證困難，用藥史難以追溯，尋求更高靈敏度的烏頭類生物堿檢測方法對烏頭類生物堿中毒的取證與用

7、藥史追溯具有重要的意義。本文采用HF-LPME-UPLC-MS/MS建立了尿樣中痕量的烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿和滇烏頭堿等4種生物堿的檢測方法。首先采用HF-LPME對尿樣進(jìn)行提取、純化和富集，富集倍數(shù)分別為102，137，301和119倍。方法顯著提高了尿樣中烏頭類生物堿的檢測靈敏度，4種烏頭類生物堿的定量限均達(dá)到0.01-0.1ng·L-1，提取回收率為80.2％～109％，RSD小于4.6％。大大延長中毒患者尿樣中烏頭類生物堿的

8、檢測時間窗，特別適用于烏頭類生物堿中毒案件的取證調(diào)查，也為涉及烏頭類生物堿的案例提供了可追溯其用藥歷史可行的方法。
　　 苯丙胺（又稱安非他明）類中樞神經(jīng)興奮類毒品的濫用已成為當(dāng)今世界嚴(yán)重的社會問題。靈敏的檢測方法不僅對發(fā)現(xiàn)偵破遏制毒品犯罪具有積極的意義，同時高靈敏的生物樣本中毒品的檢測方法，對涉毒人員用藥史追溯、取證具有重要意義。課題采用了HF-LPME純化富集方法結(jié)合FASS-CE建立了尿中痕量苯丙胺類毒品檢測方法，其對甲基

9、苯丙胺(MA)和3，4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)的富集倍數(shù)高達(dá)20萬倍。方法首先采用HF-LPME對尿樣進(jìn)行提取、純化和富集后，采用FASS-CE進(jìn)行分析測定，運行緩沖溶液為30mmol·L-1磷酸二氫鈉(pH4)-乙腈(80∶20);預(yù)進(jìn)水柱5s后，電遷移進(jìn)樣20s，電壓12kVs;運行電壓15kV;檢測波長為214nm;結(jié)果表明，MA和MDMA分別在0.05～20μg·L-1，0.1～20μg·L-1線性關(guān)系良好，LOD分