現代分離分析技術在板藍根成分分析中的應用研究.pdf

1、本論文針對板藍根及其有效成分展開了一系列藥物分析學方面的研究。采用現代分離分析技術依次建立和發(fā)展了板藍根脂溶性部位、板藍根水溶性部位、板藍根氨基酸、板藍根多糖、板藍根揮發(fā)性成分以及板藍根藥材的分析手段，試探性地提出了新的分析理論或者方法，探索出了針對板藍根不同性質目標組分的合理定性定量研究途徑。在樣品前處理和樣品分析技術兩個方面引入了一些新方法新技術，對一些現行方法進行了改進，拓寬了這些方法的應用領域，也獲得了一系列創(chuàng)新性的研究成果。本

2、論文的主要研究如下：
　　 第一章，我們依次從板藍根的化學成分、板藍根的藥理作用和臨床應用、板藍根的提取方法、板藍根的分析技術，比較全面地概述了板藍根的研究現狀。板藍根的現行分析手段不能很好地解決中藥板藍根質量控制方面存在的問題，更不用提及板藍根制劑的分析研究以及該藥物的臨床用藥安全性等方面。因此，針對板藍根藥材及其活性成分，采用現代分離分析技術，開展系統(tǒng)性研究是十分必要的。本課題研究也正是在這樣的時代要求下開始此次研究。

3、>　　 第二章，以板藍根脂溶性部位活性成分為研究對象，開展了以下幾個方面的研究：1)建立了紅外光輔助提取法(IRAE)結合響應面優(yōu)化法(RSM)優(yōu)化提取色胺酮、靛藍和靛玉紅的條件，確定了紅外光輔助提取的最佳條件。紅外光輔助提取法較傳統(tǒng)提取方法而言，十分經濟、方便、有效、而且不限制提取溶劑種類，表現出良好的提取效率。2)首次建立了11個產地板藍根脂溶性部位的改良多波長組合指紋圖譜，擬合出24個共有峰的參照指紋色譜圖，并確定了其中7個色譜

4、峰。不同產地板藍根的分層群聚分析(HcA)和主成份分析(PCA)結果表明采收時期和耕種地理位置對板藍根藥材質量都存在影響。3)首次建立了基于苯甲酸一測多評和各組分最佳檢測波長液相色譜技術(Benzoic acid-based QAMS/RODWs-HPLC)，該方法能夠克服傳統(tǒng)色譜分析依賴多種對照標準品展開定性定量分析、檢測器靈敏度較低等缺點。將單一對照品苯甲酸作為參照，借助基于苯甲酸的相對保留時間、相對校正因子，運用各組分最佳檢測波長

5、液相色譜法在230，236，245和275 nm紫外檢測波長下，有選擇地、較高靈敏度地分析待測樣品中的乙酰水楊酸，苯甲酸，水楊酸，鄰氨基苯甲酸和丁香酸。通過建立相應網絡數據庫，充分地利用和挖掘Benzoic acid-based QAMS/RODWs-HPLC方法。4)我們課題組開發(fā)了智能在線固相萃取與多級柱切換，基于苯甲酸一測多評和各組分最佳檢測波長液相色譜聯用技術(Automated on-line SPE/Multi-stagec

6、olumn-switching and Benzoic acid-based QAMS/RODws-HPLC)，該聯用技術是一種新穎的、有效的分析血漿樣品中丁香酸，苯甲酸和水楊酸的方法。這些研究成果分別發(fā)表在Journal of Separation Science(2011，34，1123-1132.)、ActaChromatographica(In Press)、Chromatographia(In Press)雜志。
　　

7、 第三章，以板藍根水溶性部位活性成分為研究對象，開展了以下幾個方面的研究：1)我們首先引入紅外光輔助提取技術(IRAE)這一新穎的前處理技術分析板藍根藥材中腺苷，確定了最優(yōu)前處理條件：260W紅外光功率，45min紅外光輻射時間，1:20固液比和40％N乙醇水溶液濃度。同時建立了一種針對板藍根中腺苷的簡單液相色譜法。紅外光輔助提取技術是一種簡單、快速、環(huán)保、低成本的提取分離方法，在中藥質量控制中具有比較好的應用前景。2)我們運用ESI-

8、MS質譜法，系統(tǒng)研究了板藍根水溶性部位化合物成分，最終確定了該部位中胞苷，尿苷，鳥苷，(R，S)-告依春和腺苷五個主要水溶性化合物。3)首次建立這些化合物的各組分最佳檢測波長液相色譜分析方法，結合優(yōu)化的微波輔助提取法(400W微波功率，1:80固液比和10min輻射時間)對板藍根水提取中五種主要化合物進行定量分析。各組分最佳檢測波長液相色譜(RODWs-HPLC)表現出非常寬的線性濃度范圍，很好的靈敏度和比較直觀的三維立體效果。這些研究

9、成果分別發(fā)表在Chromatographia(2010，72，719-724.)、Journal of the Chinese Chemical Society(2012，59，51-59.)雜志。
　　 第四章，建立了一種簡單、實用的分析20種常見氨基酸的9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-C1)柱前衍生化液相分析方法，確定了20種氨基酸的線性回歸方程，達到幾十納克級的檢測限。首次將該方法運用到不同產地板藍根氨基酸的分析中，結果：板藍

10、根氨基酸主要是脯氨酸(Pro)、精氨酸(Arg)、蛋氨酸(Met)和纈氨酸(Val)，11個產地板藍根含有四種氨基酸的總量為13.32～19.16 mg/g(板藍根生藥)。擬合出標準化板藍根氨基酸的9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生化色譜圖。該研究成果發(fā)表在Journal of the Chinese Chemical Society(2011，58，509-515.)雜志。
　　 第五章，采用了微波輔助提取，PMP柱前衍生化法分析了板藍

11、根多糖。建立了一種PMP柱前衍生高效液相色譜法分析板藍根多糖所含單糖的方法，其準確可靠，靈敏度較高，取樣量少，且分離效果理想，適用于板藍根多糖樣品的測定。由本法測定的板藍根多糖結果顯示，板藍根多糖中主要是D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-半乳糖組成。該研究成果發(fā)表在時珍國醫(yī)國藥(2012，23(1)：236-237.)雜志。
　　 第六章，借助水蒸汽蒸餾法提取板藍根揮發(fā)性成分，GC-MS聯用和NIST2008版質譜數據庫對板藍根揮發(fā)性

12、成分進行分析，篩選出20個色譜峰，初步確定了其中的17個化合物。安徽產板藍根中含有十六酸甲酯(Hexadecanoicacid Methyl ester)、9，12，15-十八碳三烯酸甲酯((Z，Z，Z)-9，12，15-Octadecatrienoicacid Methyl ester)的比例最大。首次在板藍根揮發(fā)性成分中發(fā)現：鄰苯二甲酸二乙酯(Diethyl Phthalate)、鄰苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate

13、)、二十烷醇(1-Eicosanol)、十七烷醇(n-Heptadecanol-1)和9-十六碳烯酸甲酯((Z)-9-Hexadecenoic acid Methyl ester)。結果說明不同產地因素對板藍根揮發(fā)性成分的含量和化合物種類都有明顯的影響。
　　 第七章，采用最新的傅里葉變換紅外一衰減全反射技術(ATR-FTIR)對板藍根藥材展開了整體質量分析。通過坐標轉換、背景扣除、平滑、基線校正和歸一化處理后，首次建立了11個

14、產地板藍根藥材的波數(ν，cm-1)--吸光率(A)中紅外光譜圖。依據相似度的夾角余弦法計算公式，得到了11個產地板藍根藥材之間中紅外光譜相似度值。對比板藍根主要化合物、板藍根提取部位和板藍根藥材之間譜圖，認為板藍根藥材主要含有水溶性成分，這其中包括有板藍根多糖。板藍根的良好臨床療效主要來源于板藍根水溶性成分。
　　 總之，本論文針對板藍根及其有效成分的樣品前處理和樣品分析技術這兩大熱點難點問題，發(fā)展了相關高提取率、快速便捷的新