非洲豬瘟病毒抗原SLA--Ⅰ限制性CD8+T細胞表位的研究.pdf

1、非洲豬瘟(African swine fever, ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一種急性、熱性和傳染性疾病。僅發(fā)生于豬和野豬，發(fā)病率和死亡率幾乎達100％，是尚未傳入我國的重要烈性病。自1921年在非洲東部國家肯尼亞首次發(fā)現該病以來，ASF不斷蔓延傳播，給傳入國造成了巨大的經濟損失。ASF被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須通報的烈性傳染病，在我國動物疫病病種名錄中被列為

2、“一類動物疫病”。而且目前尚無有效的針對ASF的商品化疫苗。
　　對于ASF疫苗的研究國外已有很多報道，但滅活苗、弱毒苗、亞單位疫苗等傳統(tǒng)疫苗均不能提供有效的免疫保護。近期的研究表明，體液免疫無法對ASF感染的豬產生有效的免疫保護，只能延緩病情發(fā)作，而CD8+T介導的細胞免疫在抵抗ASFV感染中發(fā)揮關鍵作用，清除豬體內的CD8+T細胞后疫苗完全失去保護效力。因此，在ASF疫苗的研制中，急需探尋一種能有效激活T細胞免疫應答的免疫方式

3、。CD8+T識別由抗原遞呈細胞MHC-Ⅰ分子遞呈的抗原多肽，因此本研究目標在于篩選能夠誘發(fā)細胞免疫的ASFV抗原MHC-Ⅰ限制性短肽以及疫苗載體。
　　ASFV的蛋白p72、p54、p30和CD2v是4種很重要的抗原蛋白。p72蛋白是病毒粒子的主要結構蛋白。p54蛋白是病毒早期感染及病毒生存所必需的一種蛋白，可能介導病毒的吸附和侵入細胞過程。p30是磷蛋白，參與ASFV吸附易感細胞。CD2v蛋白與宿主細胞CD2蛋白相似，在紅細胞結

4、合感染細胞和胞外病毒粒子過程中是必需的，吸附到紅細胞表面的特性與ASFV在易感動物體內擴散有重要關系。有研究表明，針對p72、p54、p30、CD2v的DNA疫苗可以誘導機體產生針對ASFV的細胞免疫應答，對ASFV感染產生部分保護力。
　　本研究構建和拯救了表達ASFV p72、p54、p30和CD2v蛋白的重組DNA載體、重組新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)和重組痘苗病毒(Vaccinia

5、virus，VV)，并對黑龍江現地豬進行免疫評價，以找出能有效增強針對ASFV細胞免疫的免疫方式。通過對比不同實驗組使用不同疫苗組合免疫后ELISPOT的數據，結果顯示以重組DNA初免、兩次重組痘苗病毒加強免疫能更有效的誘發(fā)豬的細胞免疫應答。同時，對實驗動物豬的SLA-Ⅰ進行分類，將之與ELISPOT的實驗結果相聯系，得到了實驗所用4種蛋白中能誘發(fā)具有不同SLA-Ⅰ背景豬細胞免疫反應的多肽組合。本研究對防制ASF的疫苗進行了探索，得到的