CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞PD-1與乙肝病毒感染者的研究分析.pdf

1、目的:
　　研究程序性死亡因子1（Programmed death-1，PD-1）在慢性乙型肝炎（the chronic hepatitis B，CHB）、乙型肝炎肝硬化（liver cirrhosis，LC）、乙型肝炎肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）三種不同程度的慢性乙肝病毒感染者外周血中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞上的表達(dá)情況，并聯(lián)合與之相關(guān)的臨床指標(biāo)進(jìn)行研究。
　　方法：
　　收

2、集2013年12月至2015年1月符合入組的患者CHB37例（男26例，女11例），LC32例（男21例，女11例），HCC32例（男26例，女6例），健康人對照組16例（男3例，女13例）。并將CHB組根據(jù)使用抗病毒藥情況分為使用抗病毒藥組（16例）和未使用抗病毒藥組（21例），LC組按Child-Pugh分級分為A級15例，B級14例，C級3例，HCC組按BCLC分期分為A期13例，B期14例，C期5例。用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD4

3、+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞上的PD-1，與此同時(shí)，用流式細(xì)胞術(shù)檢測患者的外周血粒細(xì)胞上的白細(xì)胞分化抗原64（CD64）,檢測患者乙型肝炎DNA病毒載量（HBV viral load，HBV-DNA）,檢測生化指標(biāo)中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、白蛋白（albumin，ALB）、總膽紅素（total bili

4、rubin，TB），檢測血常規(guī)中的中性粒細(xì)胞百分率（NEU％）、淋巴細(xì)胞百分率（LYM%）,C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）等相關(guān)臨床指標(biāo)。記錄患者年齡、性別、科室等臨床基本資料。
　　結(jié)果：
　　1、實(shí)驗(yàn)各組PD-1表達(dá)水平顯著高于對照組的，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。CHB組、LC組和HCC組三組PD-1表達(dá)水平比較，CD4+T細(xì)胞PD-1的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而C

5、D8+T細(xì)胞PD-1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、CHB組用抗病毒藥組和未用抗病毒藥組PD-1表達(dá)水平進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。LC組中Child-Pugh各級PD-1表達(dá)水平的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HCC組中BCLC各期PD-1表達(dá)水平的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。13例隱匿性慢性乙型肝炎的PD-1表達(dá)情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其CD4PD-1和CD8PD-1的表達(dá)平均

6、值明顯比健康者高,差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3、相關(guān)分析顯示，CD8+T細(xì)胞 PD-1的表達(dá)水平和ALB水平(r=-0.241 P=0.009)、NEU(r=-0.235 P=0.011)呈負(fù)相關(guān)，和CD64水平(r=0.225 P=0.015)呈正相關(guān)，而CD4+T細(xì)胞PD-1的表達(dá)水平只與和ALB水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.453 P=0.000），并且二者與HBV-DNA水平無明顯相關(guān)（r=-0.002 P=

7、0.985，r=-0.040 P=0.671)。
　　4、ROC曲線分析，據(jù)分析得到CD8+T細(xì)胞上PD-1的ROC曲線，曲線下面積AUC=0.516，CD4+T細(xì)胞上PD-1的ROC曲線，曲線下面積AUC=0.509，CD64 ROC曲線AUC=0.322。傳統(tǒng)的臨床指標(biāo)ALT的ROC曲線AUC=0.491，AST的ROC曲線AUC=0.322，ALB的ROC曲線AUC=0.634，TB的ROC曲線AUC=0.470。由此可以得

8、到在上述指標(biāo)中CD8PD-1、CD4PD-1、ALB的ROC曲線下面積A均略大于0.5，其中ALB的A值最大為0.634。那么說明在由乙肝病毒引起的疾病中CD8PD-1、CD4PD-1、ALB均具有診斷意義，但其診斷價(jià)值均不高。
　　5、CHB、LC和HCC組的CD64表達(dá)水平顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但實(shí)驗(yàn)各組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。聯(lián)合CRP、NEU、LYM進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果得到C

9、D64結(jié)果得到CD64與CRP呈正相關(guān)（r=0.220 P=0.017），與LYM呈負(fù)相關(guān)（r=-0.215 P=0.020）。
　　結(jié)論：
　　1、實(shí)驗(yàn)各組PD-1表達(dá)水平顯著高于健康對照組PD-1的(P＜0.05)，提示PD-1表達(dá)水平的升高對HBV感染所致疾病具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　2、CHB組、LC組、HCC組PD-1表達(dá)水平的比較并結(jié)合相關(guān)性進(jìn)行分析，隨著病情的發(fā)展，慢性乙肝病毒感染者肝臟的損傷越嚴(yán)重，

10、CD8+T細(xì)胞PD-1的表達(dá)水平越高，提示CD8+T細(xì)胞上PD-1的表達(dá)水平與慢性乙肝病毒感染者肝臟損傷程度相關(guān)。在CHB組、LC組、HCC組三個(gè)不同階段患者體內(nèi)的ALB與CD8+T細(xì)胞PD-1的表達(dá)水平存在一定的負(fù)相關(guān)性，可認(rèn)為CD8PD-1是肝臟損傷的危險(xiǎn)因素。
　　3、PD-1的表達(dá)水平在Child-Pugh分級和BCLC分期不同級別的病人中差異不大，提示PD-1的表達(dá)不能作為一個(gè)新的標(biāo)準(zhǔn)用于Child-Pugh分級和BCL

11、C分期中。
　　4、PD-1的表達(dá)水平與HBV-DNA載量進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)二者無明顯關(guān)系。但對13例隱匿性慢性乙型肝炎的PD-1表達(dá)情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其CD4PD-1和CD8PD-1的表達(dá)平均值明顯比健康者高（P=0.000＜0.01）。因此可以將PD-1作為隱匿性HBV感染的一個(gè)鑒別診斷的指標(biāo)。
　　5、PD-1表達(dá)水平的升高對HBV感染所致疾病具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。并且隨著慢性乙肝病毒感染者肝臟損傷程度加深其診斷價(jià)值